分离自美国大豆的镰刀菌及其鉴定.pdfVIP

2010年进出境植物检疫学术研讨会论文集 分离自美国大豆的镰刀菌及其鉴定 肖杰文冉俊祥杨占臣 娄少之 (南通出入境检验检疫局江苏南通226005) 摘要本文中通过对美国进境大豆病害分离，共得到32个菌株，并对其中3株镰刀菌进行了形态学和 分子生物学鉴定，确认了它们分别是尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、木贼镰刀菌(Fusariumequiseti)和拟 枝孢镰刀菌(Fusarium 工作提供借鉴，有利于更好地把好国门关。 关键词尖孢镰刀菌；木贼镰刀菌；拟枝孢镰刀菌；病害分离 镰刀菌(Fusarium 1．3单孢分离 spp．)是大豆上的一类重要 病原菌，它属于真菌界半知菌亚门丝孢纲瘤座菌目 挑取鉴定为镰刀菌属的分离物的少量菌丝，在 瘤座孢科镰孢属。此属菌种资源丰富，有近50个 显微镜下配制成合适浓度的孢子液，吸取少量轻轻 种与变种和101个专化型，而且新的种也在不断发 涂抹于透明的WA平板上，再用灭菌刀片在平板上 现，同时种内的生理分化又十分明显，是危害各种 划格，在显微镜下观察，尽量保证每一小格仅有一 作物的病原菌。一般通过土壤传播，大豆被侵染 个单孢且无小菌丝段，然后挑取含单个孢子的小琼 后，根部从根尖开始变色，呈水浸状，主根下半部显 脂块于PDA中扩大培养并保存。 现出褐色条纹，以后逐渐扩大，表皮及皮层变黑腐 1．4形态鉴定 烂，严重时主根下半部烂掉，叶片由下而上逐渐变 将各病原菌分离物的单孢菌株置于PDA培养 黄，植株矮化，结荚少，严重时植株死亡。 基上，25℃条件下培养，7天后观察在PDA培养基 本研究对美国进境大豆进行病害分离，得到了 上的培养性状及色泽，并挑取少许菌体在显微镜下 32个菌株，并对其中的3个镰刀菌进行了鉴定，证实 观测孢子及产孢细胞的形态和大小，厚垣孢子的有 了美国大豆中镰刀菌的多样性，充实了大豆病害资 无、数量、形态、大小等，并进行显微计测，然后根据 源库，对港口的植物检疫工作具有重要的借鉴作用。 培养性状和形态特征，参考Booth分类系统，对照 1材料与方法 《真菌鉴定手册》等工具书，将各菌株鉴定到种或 1．1供试材料 变种。 美国进境大豆种子及豆杆； 1．5分子生物学鉴定 PDA培养基(马铃薯200 g，葡萄糖 1．5．1l’rs区PCR g，琼脂18 189，水1000mE)：用于镰刀菌菌株的分离、保存及 鉴定； 上海英骏生物技术有限公司合成(ITS4：5’一Tc． WA培养基(琼脂20 g，氯霉素30—50mg，水 1000 mE)：用于菌株纯化及单孢分离。 1。2分离培养 25ul，反应体系中各试剂的终浓度为：1．0×buffer、 2．5mmo]／L mmol／L 挑取有病斑等可疑症状的大豆组织，切成5×5 MgCl2、0．2 dNTP、引物各50 mm的小块，在70％的酒精里浸3～5s，然后移人 1．o％次氯酸钠中处理8—10min，再用无菌水冲洗 min，然后94℃ 25ng。反应过程为95℃预变性2 3次，将经表面消毒的组织块用灭菌滤纸吸干后， 变性40s，55℃退火1min，72℃延伸1min，进行