分子生物学技术在提高微生物次生代谢产物多样性中的应用.pdfVIP

分子生物学技术在提高微生物次生代谢产物 多样性中的应用 王开梅”1，2 江爱兵1,2闵勇1,2刘晓艳1,2杨自文1，2 (1湖北省生物农药工程研究中心，武汉430064) (2湖北省农业科技创新中心生物农药分中心武汉430064) 摘 要人类开始利用微生物次生代谢产物的历史较为久远。但是真正有目的地从微 生物中筛选微生物次生代谢产物，则起始于弗莱明爵士从青霉菌中发现青霉素。自青霉素发 现以后，微生物成为生物活性物质筛选的重要来源。微生物次生代谢产物在医药及农药研究 开发中发挥了重要的作用。 在进行微生物次生代谢产物研究时，如何提高微生物次生代谢产物的多样性是摆在研究 者面前的重要课题。分子生物学技术已成为提高微生物次生代谢产物多样性的一个重要手段 通过引入抗生素生物合成的调控基因有可能激活抗生素产生菌中的沉默基因，使另一结构 的抗生素的生物合成开始，这样就可能得到新的化合物。近年来，随着基因组学技术的发展，一 些微生物的基因组序列被测定。通对产生已知抗生素的微生物菌株的基因组DNA序列的分 析，研究者发现，其中存在的与微生物次生代谢产物生物合成的基因簇的数量与其所产生的次 生代谢产物要多得多。通过分子水平上对微生物次生代谢产物，特别是抗生素生物合成的研 究，一些抗生素合成的调控基因、合成基因簇被克隆，其中以聚酮合成酶基因研究最多，也最为 深入。而大量聚酮合成酶基因的克隆，使得到抗生素的组合生物合成成为可能，研究者可让微 生物按照自己设定的路线，合成非天然的微生物次生代谢产物。宏基因组文库的筛选是研究 不可培养微生物的次生代谢产物的主要方法，并有研究者从宏基因组文库中发现了新的生物 活性次生代谢产物。 随着技术的不断进步和我们对微生物了解的不断深入，可以预计，越来越多的具有生物活 性的微生物次生代谢产物将会发现。 人类开始利用微生物次生代谢产物的历史较为久远。但是真正有目的地从微生物中筛选 微生物次生代谢产物，特别是具有生物活性的次生代谢产物，则起始于弗莱明爵士从青霉菌中 发现青霉素。自青霉素发现以后，微生物成为生物活性物质筛选的重要来源。人们从微生物发 现了20000多个具有生物活性的微生物次生代谢产物川。微生物次生代谢产物在药物研究开 发中发挥了重要的作用【l，2，3，4，5】，并将继续发挥其作用【6，7】。2001至2004年全球范围内35 个销售额最高的处方药中，天然产物或其相关化合物分别占到销售总额的40％．24％和26％121 而以微生物次生代谢产物开发的农药或以微生物次生代谢产物进行衍生或结构修饰而开发 的农药也占据了农药市场份额的相当比重[8，9，10】。 在进行微生物次生代谢产物研究时，如何提高微生物次生代谢产物的多样性是摆在研究 者面前的一个重要课题。将抗生素合成的调控基因导入其它菌株中，可导致新的次生代谢产 物的产生。随着人们对抗生素合成的分子机理的了解，通过对微生物基因组的扫描及次生代 谢产物合成基因簇的解析，可预测微生物可能产生的新的次生代谢产物。通过分子水平上对 微生物次生代谢产物，特别是抗生素生物合成的研究，一些抗生素合成的调控基因．合成基因 簇被克隆，其中以聚酮合成酶基因研究最多，也最为深入。而大量聚酮合成酶基因的克隆，使得 到抗生素的组合生物合成成为可能，研究者可让微生物按照自己设定的路线，合成非天然的微 389 生物次生代谢产物。另外，分子生物学技术一方面可提高微生物次生代谢产物的质量，另一方 面还可提高微生物次生代谢产物的产量，提高新的化合物发现的机会[1l】。利用宏基因组技术 来发掘不可培养微生物资源中可能存在的新的微生物次生代谢产物也是分子生物学技术应 用的一个重要方面。本文从以下这个方面对提高微生物次代谢产物的多样性的分子生物学手 段进行综述。 l沉默的微生物次生代谢产物的发掘 通过引入抗生素生物合成的调控基因有可能激活抗生素产生菌中的沉默基因，使另一结 构的抗生素的生物合成开始，这样就可能得到新的化合物。Horinouchi等【12】在天蓝色链霉菌 A3(2)的染色体上克隆了支配A因子(是链霉素合成和胞分化必需的调节因子)产生基因 afsB(为放线紫红素的调控基因)，克隆到质粒plJ41上，导入变青链霉菌中。此时发现该菌能大 量产生原来并不产生的放线紫红素及十一烷灵菌红素。这可能是由于afsB基因激活了变青链 霉菌中合成上