氨等离子体锚定短肽的消旋聚乳酸骨支架研究.pdfVIP

1376 Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery, November 2010, Vol. 24, No.11 · · 氨等离子体锚定短肽的消旋聚乳酸骨支架研究 1 1 2 1 1 1 3 3 许子星 陈建庭 尹诗衡 朱青安 李涛 查丁胜 姜晓锐 张鑫鑫 【摘  要】    目的  运用氨等离子体辅助接枝技术，在消旋聚乳酸（poly-D ，L-lactide acid，PDLLA ）表面以酰胺键 接枝甘氨酸- 精氨酸- 甘氨酸- 天冬氨酸- 丝氨酸（Gly-Arg-Gly-Asp-Ser，GRGDS ）短肽，探讨制备活性骨替代材料的可 行性。  方法  使用溶剂浇铸/ 颗粒沥析法制备圆片状直径8 mm、厚1 mm 的PDLLA 三维骨支架，行氨等离子体改性处 理制备表面氨基化PDLLA （aminated PDLLA，A/PDLLA ），测量未改性（0 min 对照组）及改性5、10、20 min 组支架的孔 径、孔隙率和表面水接触角。以上各组A/PDLLA 放入1 mg/mL FITC 标记的GRGDS 肽溶液[1- （3- 二甲基氨基丙基）-3- 乙基碳化二亚胺盐酸盐、N- 羟基琥珀酰亚胺、活性肽的摩尔比值为 1.5 ∶1.5 ∶1.0]，室温下低速震荡24 h 行表面接枝处 理，得到接枝肽处理材料（peptides conjugated A/PDLLA ，PA/PDLLA ）。对未改性（0 min 对照组）、改性5、10、20 min 及其 后接枝肽处理的材料行X 射线光电子能谱（X-ray photoelectron spectroscopy ，XPS ）仪检测；对PDLLA 和改性0、5、10、 20 min 后接枝肽处理的材料行激光共聚焦显微镜观察及高效液相色谱（high performance liquid chromatography ，HPLC ） 定量分析。全骨髓贴壁法分离、培养SD 大鼠BMSCs ，取第3 ～6 代细胞接种于以下3 组材料：20 min 氨等离子体改性 组（A/PDLLA 组）、20 min 氨等离子体改性后接枝肽组（PA/PDLLA 组）及未经处理的PDLLA 对照组（PDLLA 组）。各 组BMSCs- 材料复合物培养 16 h 后测定细胞上架数及上架率；培养4 、8 d 行扫描电镜观察。  结果  PDLLA 孔径和孔 隙率不随氨等离子体改性时间变化而变化（P 0.05 ）。随着氨等离子体改性时间延长，A/PDLLA 支架表面水接触角逐渐 减小，材料亲水性能逐步改善，各组间比较差异均有统计学意义（P 0.001 ）。XPS 检测示，A/PDLLA 支架表面出现N 元 素，且随改性时间延长，N1s 峰渐趋明显，N/C 逐渐加大；PA/PDLLA 支架N/C 相应加大，表面出现S2p 峰。激光共聚焦显 微镜观察示PA/PDLLA 支架荧光强度随改性时间延长而明显增强。HPLC 成功测得经10 min 和20 min 氨等离子体改性 后接枝肽处理的PA/PDLLA 接枝肽量，两者比较差异有统计学意义（P 0.001 ）；而PDLLA 及经0、5 min 氨等离子体改 性后接枝肽处理的PA/PDLLA 接枝肽量未检出。与BMSCs 复合培养16 h，A/PDLLA 组和PA/PDLLA 组细胞上架数和 上架率均高于PDLLA 组，3 组间两两比较差异均有统计学意义（P 0.01 ）。扫描电镜观察示，A/PDLLA 组和PA/PDLLA 组比PDLLA 组更能促进BMSCs 贴附增殖，尤以PA/PDLLA 组最明显。  结  论 氨等离子体改性能明显促进PDLLA 表 面以酰胺键接枝FITC-GRGDS 短肽；此仿生人工骨材料生物活性稳定，能明显促进BMSCs 贴附和增  殖。 【关键词】 骨组织工程 消旋聚乳酸 氨等离子体 活性肽 仿生支