RP-HPLC法测定人尿苷二磷酸葡醛酸转移酶UGT1A3转基因细胞中槲皮素.pdfVIP

第40卷第1期 浙江大学学报(医学版) Vol40 No1 2011生 JOURNALOFZHEJIANG 2011 UNIVERSITY(MEDICALSCIENCES) 1．01．002 http：∥www．journa[s．zju．edu．cn／med DOI：10．3785／j．issn．1008-9292．201 RP—HPLC法测定人尿苷二磷酸葡醛酸转移酶 UGTlA3转基因细胞中槲皮素 姚艳，张 霞，刘 瑶，余露山，蒋惠娣，曾 苏 (浙江大学药学院药物分析与药物代谢研究室，浙江杭州310058) [摘要]目的：建立反相高效液相色谱法测定人重组UGTlA3转基因细胞中槲皮素，并研究该 酶对槲皮素的相关代谢及动力学参数测定。方法：Bac-to．Bac系统表达的人UGTlA3重组酶细胞破 Luna 碎液与槲皮素共孵育之后，以乙腈沉淀蛋白，采用木犀草素为内标，以Phenomenexc博柱为分 析柱，甲醇(A)旬．1％甲酸溶液(B)为流动相梯度洗脱：0—25 min(80：20)，25．5～27min(80：20-30：70)，27—30min(30：70)；流速1．0ml／min，紫外检测波 长为368nm。结果：槲皮素在5—200 IxmoL／L内线性关系良好(r=0．9999)，检测限为1．25p。mol／L (S／N13)，定量限为5 V。。为(284．50±24．35)nmol·min～·g～，清除率V。。x／K。为4．52ml·min-。·g～。结论：建立的 反相高效液相色谱方法准确、简便；可用于槲皮素在人UGTlA3转基因细胞中的代谢研究。 [关键词]槲皮素／分析；色谱法，高压液相； 葡糖醛酸基转移酶／生物合成；重组酶类 917 [中图分类号]R 【文献标志码]A A3 Determinationof metabolisminUGTl cells quercetin cDNA-expressing RP．HPLC by YAO Pharmaceutical Yan，ZHANGXia，LIUYao，YULu—shan，JIANGHui—di，ZENGSu(Departmentof and Pharmaceutical 31 DrugMetabolism，Collegeof Sciences，ZhejiangUniversity，Hangzhou0058， Analysis China) a the in A3 RP—HPLCmethodfor determinationof UGTl [Abstract]Objective：Todevelop quercetin cDNA．transfectedcells．Methods：Theofcellstransfectedwithhumanrecombinanturidine5． lysate