2015-12-08.doc

2013-12-08 承担单位：福建省农科院农业生物资源研究所 试验设计： 试验项目：青海土壤中芽胞杆菌的分离、纯化及保存（四） 试验人员：曾庆才 试验负责：肖荣凤 报告日期：2013-12-08 计数月份：2013年12月 研究资格系数 (0.5-1.0) 实验设计系数 （0.9-1.0） 报告得分 总分 实验设计 实验记载 实验分析 实验简报 实验文章 1-20% 21-40% 41-60% 61-80% 81-100% 1%-5% 设计，实施实验，记载，分析清晰，结论清晰文献完整，发表水平 福建省农业科学院农业生物资源研究所 农业微生物研究中心 电话: 0591 传真: 05911．试验目的土壤微生物大部分对作物生长发育是有益的，它们对土壤的形成发育、物质循环和肥力演变等均有重大影响。对作物来讲是影响其生长发育的重要环境条件之一。 [1]。而土壤又是芽胞杆菌主要的来源，因此，分离、筛选各种不同的芽胞杆菌为生物农药的开发等提供了基础资源[2]，具有重要意义。 为了分离得到新的芽胞杆菌，本实验对采至青海省班玛县红军沟的土壤标本进行了分离，采用稀释平板计数法统计了几种不同土壤中各种芽胞杆菌。一方面是为了建立青海省班玛县红军沟地区的微生物库，另一方面分离芽孢杆菌也是为了能为以后的实验提供合适的菌株，为生防微生物的筛选提供丰富的种质资源。 2．试验方法2.1 材料 2.2 培养基 牛肉膏蛋白胨培养基（NA）：牛肉膏3 g、NaCl 5 g、蛋白胨10 g、琼脂15-20 g、水1000 mL、 pH7.2-7.5。 2.3 仪器 试管、锥形瓶150 mL，移液枪，涂布棒，培养皿，振荡器，培养箱。 2.4 试验方法 2.4.1 土样处理 取种土样，加入编号的锥形瓶内（150 mL），瓶内装有90 mL无菌水，加土样各10 g。震荡20 min（摇床）后水浴10 min（80 ℃）。10-15 min均可，中间震荡2-3次。 2.4.2 土壤原液的配置 吸取1 mL原液至装有9 mL无菌水的试管，即配成10-2浓度，依次稀释配置成10-3，10-42.4.3 平板涂布 超净台上无菌操作，每个梯度重复2次；涂布梯度为10-3、10-4。 2.4.4 培养 用袋子装好，30 ℃恒温箱培养1-2 d。 2.5 计数 统计平板上的菌落数，描述菌落形态、大小等，算出每一稀释度菌落的平均数。菌落数计算公式：每克土样中微生物的数量＝同一稀释度的菌落平均数×稀释倍数／含菌样品克数。 2.6 纯化菌株 用平板划线法，用接种环在NA平板上挑取单菌落在新的平板上划线，划线后盖上培养皿盖，倒置温室培养，培养后重复多次直到认为菌落完全被纯化。 2.7 菌种保藏 对纯化菌种编号后拍照，保存，-80甘油保存。试验结果 青海省班玛县红军沟不同的土壤分离芽孢杆菌如下图 土样6249反面 土样6249正面 土样6251反面 土样6251正面 青海省班玛县红军沟土壤中分离的菌株的形态特征描述和数量及照片见表和 表1从土样标本中分离的芽胞杆菌编号、形态描述及数量 土样编号 菌株编号 大小 表面 颜色 干湿 形状 高度 边缘 透明度 含量（×102cfu/g） 6249 FJAT-19568 中 褶皱 淡黄 干 圆 隆起 整齐 不 20.00 FJAT-19569 小 光滑 米白 湿 水滴状 枕状 整齐 透明 40.00 FJAT-19570 中 光滑 灰黄 湿 圆 枕状 整齐 不 20.00 FJAT-19571 小 光滑 白 湿 圆 边缘隆起 整齐 不 20.00 FJAT-19572 中 光滑 米白 湿 圆 隆起 整齐 不 40.00 FJAT-19573 小 光滑 淡黄 湿 圆 突起 整齐 不 100.00 FJAT-19574 大 粗糙 淡黄 干 圆 扁平 整齐 不 20.00 FJAT-19575 大 粗糙 白 干 放射状 扁平 丝状 不 120.00 6251 FJAT-19576 大 粗糙 白 干 圆 扁平 不规则 不 46.00 FJAT-19577 中 粗糙 白 干 圆 中间隆起 整齐 不 10.00 FJAT-19578 小 褶皱 淡黄 湿 圆 中间隆起 整齐 不 16.00 FJAT-19579 大 粗糙 白 干 放射状 扁平 丝状 不 8.00 FJAT-19580 小 光滑 米白 湿 圆 枕状 整齐 透明 12.00 FJAT-19581 中 褶皱 淡黄 湿 圆 中间隆起 整齐 不 2.00 FJAT-19582 小 光滑 淡黄 湿 圆 隆起 整齐 不 60.00 FJAT-19583 中 光滑 淡黄 湿 枕状 中间隆起 整齐 不 30.00 FJAT-19568反面FJAT-19568正面F