抗癌药物8-氮鸟嘌呤和DNA相互作用的电化学研究.pdfVIP

蔓尘旦全里皇坌堑些堂堂查坌竖堡!堕—— 抗癌药物8一氮鸟嘌呤与DNA相互作用的电化学研究 王翠红 苏永恒 冶保献 (郑州大学化学系，郑州450052) 抗癌药物8一氮鸟嘌呤(8．azaguanine简称8-AG)又称“癌散”，它通过抑制核糖核苷 还原酶，阻止核糖核苷转变成脱氧核糖核苷酸．从而能抑制微生物及肿瘤细胞的增殖。在 临床上，癌散主要用于治疗白血病、子宫癌等”1，但服药后常出现恶心呕吐、白细胞减少 等不良反应。我们在实验中发现：在浸蜡石墨电极上，于含8-AG的HAc—NaAc(pH3．6) 缓冲溶液中加入DNA分子后，二者之间发生静电引力作用．使得8-AG的氧化峰明显地 正移，峰电流降低：同时随着反应时间、反应温度及DNA加入量的增加，二者作用更强 烈。我们分别利用循环伏安技术、电位阶跃暂态技术和差示脉冲伏安手段研究了8-AG与 DNA相互作用的关系，求出了对应的动力学参数，建立了定量检测DNA浓度的方法。 1实验部分 DNA变性处理：将一定浓度的天然双链DNA(dsDNA)放在100℃的沸水浴中约25 分，然后迅速地放入冰浴中冷却约30分，使天然双链DNA解链变性为单链DNA(ssDNA)， 以备使用。下文中，若非特别指出，所指DNA均为dsDNA。 2结果与讨论 2．1 液中，分别对一定浓度的8-AG、DNA及加入不同量DNA的8-AG溶液搅拌lo分钟，在 中，电位范围0．9V～1．35V内无氧化峰产生： 而对于8．AG，在其中加入DNA后，其峰电 位发生正移，峰电流却显著降低。随着DNA 加入量的增加，其峰电位正移、峰电流降低的 现象越明显。这表明：DNA中变性部分与 8．AG发生了相互作用，从而干扰了8-AG的 电子云排布．引起8．AG峰电位正移。 《叶三：l口u 同时，比较dsDNA和ssDNA与8一AG的 作用，二者均使得8-AG的峰电位正移，峰电 流降低。尤其是ssDNA，使得这种偏移与减 低的现象更严重，即说明dsDNA中发生变性 的部分与8-AG发生了相互作用。而且发现峰 图I 8-AG及其与DNA作用的差示脉冲伏安图 电流随pH的增大而减小，峰电位随pH的增底液组成：HAc．NaAc(pH3．6)+ 大而负移，说明lH+l参与了该电极反应。 (a)o·彻5mg／mLdsDNA …，2．。2 DNA与厶G作用时间、反应温度器55×x1010sSmm。ol，Ll／L￡惫仉00lmg，mLd。DNA 的影响 rdl5x10SmoI／L dsDNA 8-AG+0．002m。g／mL 我们考察了二者作用时间、反应温度对 8-AG峰电流的影响。结果发现：随着DNA与8-AG反应时间的增加，8-AG的峰电流降 低越多，而其峰电位越正移；而且随着反应温度的增加，8-AG的峰电流也呈降低的趋势． 达到30℃时作用完全。 2．3扫描速度的影响 一 !!些丝皇坌堑些兰—— ————————————————————————————’—————————————————————————————————一 保持测试液组成不变，改变电位扫描速度，发现8-AG与DNA作用后的峰电流随扫 速增加而增大，峰电位则逐渐正移，而且峰电流与扫速的二分之一次方呈正比。所以可以 说，8-AG与DNA作用后，在浸蜡石墨电极上的氧化反应主要以扩散控制为主的，这一 点，与未加DNA之前8-AG在石墨电极上的电极反应是一致的。 2．4 DNA加入量对8-AG的影响 用差示脉冲伏安法(DPV)考察8-AG峰电流与DNA加入量的关系。结果表明：随着 DNA加入量的增加，8-AG峰电流逐渐降低，而且峰电位也随加入量增加而正移。而且 8-AG峰电流与DNA的浓度在10ug／mL的范围内呈线性关系，可用于DNA的定量测定。 3电极过程动力学参数的测定 分钟后在石墨电极上的电子转移数n=1．89。这与未加DNA时8-AG的转移电子数是一致 的。同时，根据能斯特方程求得有两个IH+1参与了电极反应。(2)8-AG在电极表面