流动注射化学发光法测定人血清蛋白地研究.pdfVIP

2006年11月 第四届海峡两岸分析化学学术会议论文集 湖北·武汉 流动注射化学发光法测定人血清蛋白的研究 訾言勤+，赵丹华，陆丽园，袁秀香 (淮北煤炭师范学院化学系，安徽淮北235000) 摘要：在氢氧化钠介质中，采用流动注射技术研究了高锰酸钾一吖啶橙化学发光体系的发光行 为及人血清蛋白的对影响，对影响化学发光的因素进行了实验条件的优化及化学发光机理进行了 探讨，建立了化学发光测定人血清蛋白的新方法。结果表明：在1．0～8．OmegL范围内，人血清 对合成样品进行分析获得满意的结果。 关键词：流动注射；化学发光；高锰酸钾；吖啶橙；人血清蛋白 1实验部分 1．1主要仪器和试剂 中，用水稀释至刻度，配成100pg／mL，作为储备液；吖啶橙(分析纯，上海化学试剂采购供应)，称 10-2mol／L 浓度。其余均为分析纯或生化试剂：水为二次蒸馏水。 1．2实验方法 按流路图连接试剂和仪器，启动仪器，输入实验参数。步骤1：时间3s，主泵速度0，负泵速 度95，阀位采样，不采集数据。步骤2：时间8s，主泵速度95，负泵速度0，阀位采样，采集数 据。平行测定6次，计算机自动采集数据。 2结果与讨论 2．1体系发光现象及人血清白蛋白的影响 在实验条件下，高锰酸钾氧化吖啶橙发光现象及加入人血清白蛋白对发光强度的影响。人血 清白蛋白使体系发光强度显著增强，发光强度与人血清白蛋白含量存在线性关系。在实验中加入 3．0mol／L。人血清白蛋白的浓度为5．0mg／L。 2．2吖啶橙浓度的影响 X 5mg／L时，发现5 X 度为2．O×10-4mol／L时，人血清白蛋白对发光强度有最大的增强作用，在3 时，人血清白蛋白对发光强度的增强作用几乎不变；5X 10～～1．O×10一mol／L，对发光强度的增 ‘通讯联系人 158 2006年11月 第四届海峡两岸分析化学学术会议论文集 湖北·武汉 强作用逐渐减小。 2．3高锰酸钾浓度的影响 在4．0×10-4～9．0×10-4mol／L时人血清白蛋白对发光强度增作用逐渐增大且趋于平稳。 2．4氢氧化钠浓度的影响 在保持其他情况不变的情况下，实验了O．5～5．Omol／L的氢氧化钠对发光强度的影响。实验 表明，发光强度随氢氧化钠浓度的增大而增大，且当3．0mol／L以上时，人血清白蛋白对体系发 光强度的增强作用相差不大。 2．5负高压的影响 负高压．800以下，峰强度较低，灵敏度差。负高压在．800以上，峰强度高度大，灵敏度高， 然而基线不稳，上升较快，测量的再现性较差。当负高压为．800时，灵敏度较高，同时又能保 证重现性。 2．6泵速的选择 结果表明，泵速控制在95r／rain能够保证上述过程：泵速过快，使试样和试剂反应不完全很快 冲出芯片检测管路而使化学发光信号下降；而泵速过慢，试样扩散，峰拖尾现象严重。也得不到所 要的理想结果。 2．7标准曲线、精密度及检出限 在选定的条件下，人血清白蛋白的浓度在1．0～8．Omg／L时，与化学发光强度有良好的线性 为O．682％，根据IUPAC建议，计算出方法的检测限为4．1×10-11叽。 3样品分析 按照一定比例加入人血清白蛋白，次黄嘌呤，DNA，核糖核酸(酵母)制成样品溶液，在 25 测量样品及加入人血清白蛋白后溶液的发光强度，进行标准加入法回收率实验。回收率96％。 参考文献： 【1】王颖臻．光谱实验室，2005，22(6)：1309． [2】陈莲惠，刘绍璞．分析科学学报，2004，20(3)：266． [3]李世风，崔华．分析化学，2001，29(3)：333． [4】范春蕾，温珍昌．海南大学学报自然科学版，2006，24(1)：66． [5】张子红，杜凌云，王术皓，等．光谱实验室，2001，18(5)：584． 【6]赵丹华，訾言勤．分析试