HIV的实验室诊断.docVIP

HIV实验室诊断 一、HIV病毒是带有包膜的RNA逆转录病毒，在我国流行的是HIV-1。 二、HIV实验室诊断 人体感染HIV后，血液中最先出现HIV抗原，然后很快消失直到疾病后期才重新出现。几周后出现IgM抗体并很快消失，此后,IgG抗体出现并一直存在。因此，HIV感染的实验室诊断以抗体检测为主，病毒及相关抗原的检测为辅。 抗体检测分为初筛试验和确证试验两种，初筛试验为阳性的血清必须进一步确证，确证实验为阳性的方可报告为HIV感染阳性。 多聚酶链式反应(PCR)主要用于检测血浆中HIV的RNA含量，目前主要用于预测母亲将HIV传染给胎儿的可能性以及新生儿的HIV感染状况。此外，尚可用于判断病人的预后及监测抗病毒治疗的效果。 （一）HIV抗体的初筛检测 初筛试验的要求是敏感性高，理论上要求达到100%，尽可能避免漏掉可能阳性的对象，相对来说，对特异性要求不是太严，允许有少量假阳性，这些假阳性可以通过重复试验和确证试验排除。 HIV抗体初筛检测的方法很多，如酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)、明胶颗粒凝集实验(gelatine particle agglutination assay, PA)、乳胶凝集实验(latex agglutination assay, LA)、各种快速检测实验(rapid tests)等。 1．酶联免疫吸附实验检测HIV1/2 型抗体， 酶联免疫吸附实验（ELISA）是最常见的HIV抗体检测方法，它具有准确性高、价格低廉、判断结果有客观标准、结果便于记录和保存等优点，适合于大批量标本的检测，是献血员筛选和临床诊断最常用的方法。 3．胶体金法检测HIV1/2抗体实验 胶体金法检测HIV抗体是一种不需要任何仪器设备的血清／血浆检测法，它利用免疫层析分析原理来快速检测血清／血浆中是否含有HIV抗体，从而用于判断人体是否受到HIV1型／HIV2型病毒感染。 注意：由于样本中HIV抗体滴度的不同，测试区（T）内的红色条带会显现出不同深浅的颜色。但是，本试剂盒的测试结果不能做为判定样本中抗体滴度高低的依据。 (二)、初筛试验每一次检测阴性者可报告阴性，若第一次检测阳性，则需进行复测，复测时（最好用不同类型的试剂）可同时测定两孔，判定方法如下： 第一次检测 第2次检测 结果判定 （-） 阴性 （+） （-）（-） 阴性 （+） （+）（-）/（+） 阳性 初筛阳性的标本不能发报告，必须将血样或血袋送本省（本市）艾滋病监测检验中心确认实验室进一步做确证试验。确证试验阳性者，由省（市）监测中心给送检单位发出抗-HIV阳性报告，同时上报卫生厅（局）和卫生部疾病控制司备案。确认试验阳性和可疑的血袋均需送确认实验室妥善处理，绝对不能发出使用 （三）确证（确认）试验 确证（确认）试验主要用蛋白印迹试验(Western Blot, WB)。也是测抗体。 美国用ELISA法发报告。 三、艾滋病病原学诊断中的几个问题。 1、明确不同实验方法的意义和适应范围：HIV血清学检测分为初筛和确证两类。初筛实验出现的阳性结果，应再次重复实验，若仍为阳性，则应用确证实验去证实，只有确证实验是阳性的标本方可报告为HIV抗体阳性。另外，能引起艾滋病的病毒分为两型，即HIV-1和HIV-2，两型病毒间只有少部分抗原有交叉（主要是Gag基因编码的核蛋白）。因而各型病毒试剂只能有效地检测出同型病毒的抗体。 2、针对HIV感染不同时期选用不同的检测手段。HIV原发感染后的两周内，用任何方法均无法查到病毒的存在，2周后出现病毒血症，此时可用抗原检测方法、检查病毒抗原或测定病毒逆转录酶活性，而不能用血清学方法，因为抗体要到感染后6-8周才会出现。此后就只能用抗体检测方法，直到艾滋病的出现，因为在这段时间HIV抗原很难从血清中查到，待发展到艾滋病阶段时才会重新出现。 3、HIV抗体测定的灵敏度、特异度和预测值： 敏感性：是指在有抗体存在的标本中，检出抗体的准确性。敏感性低的试验将有许多假阴性。 特异性：是指在没有抗体存在的标本中，检测其抗体缺失的准确性。特异度低的试验将有许多假阳性。 理想的是，一种试验应当具有100%的敏感性和100%的特异性。但实际上，没有一种生物试验能满足这样的要求。但在敏感性和特异性最高的试验方法当中现行的HIV检测方法还是可取的，在理想的实验室条件下，许多市售的HIV抗体试验方法的敏感性和特异性都在99%以上。除非由于检验人员造成人为误差，这种检验方法