嗜线虫致病杆菌Xenorhabdus+nematophilus+HBm1菌株杀虫活性地研究.pdfVIP

嗜线虫致病杆菌Xenorhabdus HBml nematophilus 菌株杀虫活性的研究 王勤英1李秀花2南宫自艳1陆秀君1刘建密1宋萍1孔俊英1 (1．河北农业大学植保学院，保定071001 2．河北省农林科学院植物保护研究所，保定07looo) 摘要嗜线虫致病杆茵Xenorhab缸nematophilus HBml共生的昆虫病原细茵。生测结果显示。该菌株有较广的杀虫谱．对小菜蛾2龄幼虫 析后得到的胞外和胞内蛋白提取物对初孵棉铃虫幼虫的相对生长抑制率分别为95．62％和 有显著变化，80℃处理lOnfin，其杀虫活性显著下降。 关键词 昆虫病原线虫 共生茵 生物测定 胃毒活性 昆虫病原线虫共生菌是一类存在于线虫消化道内并与线虫互惠共生的细菌，此类细菌革 的作用。共生菌以线虫为载体进入昆虫血腔，在昆虫血腔内繁殖，产生毒素，一般在48h内 使昆虫患败血症而死亡。此外，共生菌能分解营养物质，产生抗菌素抑制其他杂菌的污染， 为线虫生长、发育、繁殖提供理想的生存环境…I。自然条件下共生细菌作用于昆虫血腔内， 蛋白复合物【2J，该报道引起了人们极大的关注。现已发现其他一些种类的共生菌也存在口服 杀虫活性，且不同种的共生菌及同种不同品系的杀虫活性存在着较大的差异L3．4J。昆虫病原 线虫共生菌杀虫活性的研究为开发新的杀虫蛋白和杀虫基因提供了新途径bJ。 本文对本实验室分离保存的嗜线虫致病杆菌X—m，c印bⅡwHBml菌株的杀虫活性进行 了深入研究，为进一步探索其开发利用价值提供理论依据。 l材料和方法 1．1供试菌株 ttBml(从河北省满城县土壤中分离)。 X．nematophilus 1．2供试昆虫 棉铃虫(Helicoverpa瓣m)、甜菜夜蛾(Spodoptera 删)、粘虫(Mythimnaseparata)、小菜峨(Plutella xylos把lla)、菜青虫(Pierisrapae)、大 蜡螟(GalleriamaaoneUa)均由害虫生防实验室养虫室提供。 J镏 河北省植物保护研究进展 1．3培养基 ． 0．049，水1000ml，pH7．2—7．4。 牛肉汤培养基：牛肉蛋白胨log，牛肉膏39，氯化钠59，水1000ml，pH7．2—7．4。 1．4共生菌培养液的制备 落接人牛肉汤培养基中，于28℃、200rpm振荡培养过夜，再按1％接菌量转接于牛肉汤培养 L5杀虫物质的粗提取 1．5．1胞外蛋白提取物的提取共生菌菌液经10 10 得即为胞外蛋白提取物，一20℃保存备用。 1．5．2胞内蛋白提取物的提取共生菌菌液离心后所得的细胞，先用磷酸缓冲液洗3次， 再用少量磷酸缓冲液悬浮细胞，在冰上用超声波破碎细胞。破碎液经10000rpm、4。C离心 20min，所得上清过0．45wn滤膜后加入硫酸铵至85％的饱和度，其他处理同1．5．1。 1．6生物测定方法 1．6．1 胃毒活性的测定对初孵棉铃虫、甜菜夜蛾、玉米螟、粘虫等幼虫胃毒活性的测定： 24孔细胞培养板，以无菌牛肉汤培养基为对照。每～处理设3个重复，共72头幼虫，除棉 铃虫为每孔1头外，其余均为每孔3头。鬣于(264-1)℃、光照时间为14h的光照培养箱内 培养，第5d时记录活虫数并称量活虫体重，根据公式1计算体重抑制率。 100 (1) 生长抑制率(％)；塑蠼麴号笺毳岙篱霆挚虫馇重x 对小菜蛾2龄幼虫和菜青虫初孵幼虫胃毒活性的测定：在共生菌菌液中加0．1％洗涤灵， 0．1％洗涤灵的无菌牛肉汤培养基为对照。每个处理设3个重复，每个重复20头幼虫，放人 计算校正死亡率。 1．6．2胞外和胞内蛋白提取物血腔注射杀虫活性的测定用}lBml菌株发酵液的胞外和胞 内蛋白提取物(其蛋白含量均相当于发酵液中的30倍)分别注射大蜡螟5龄幼虫，每处理 重复3次，每重复15头幼虫，以磷酸缓冲液为对照，用微