实验七酶的特性(唾液淀粉酶性质的研究).docVIP

实验七、酶的特性（唾液淀粉酶性质的研究） ［目的要求］ 1、进一步学习和了解酶的性质。 2、学会检查酶的性质的原理和方法。 ［实验原理］ 酶与一般催化剂最主要的区别之一是酶具有高度特异（专一）性，即一种酶只能对一种底物或一类底物（此类底物在结构上通常具有相同的化学键）起催化作用，对其他底物无催化反应。例如，淀粉酶和蔗糖酶虽然都是催化糖苷键的水解，但是淀粉酶只对淀粉起作用，蔗糖酶只水解蔗糖。还原糖产物可用本乃狄试剂鉴定。 通过比较淀粉酶在不同pH、不同温度以及有无抑制剂或激活剂时水解淀粉的差异，说明这些环境因素与酶活性的关系。 温度、PH对淀粉活性影响酶的催化活性受到温度的影响，在一定温度范围内，酶才有活性，且在最适温度下，酶反应速度最大。大多数动物酶的最适温度为37℃-40℃，植物酶的最适温度为50℃-60℃。对温度的稳定性与其存在形式有关，有些的干燥制剂，虽加热到100℃，其活性并无明显变，但在100℃的溶液中很快地完成失去活性。低温能降低或抑制的活性，但不能使失活。 酶的激活和抑制作用酶是具有高效专一催化活性的蛋白质，其活性常受温度PH及些物质的影响。 某些物质可以增加其活性，称为激活剂；某些物质能降低其活性，称为抑制剂。很少量的激活剂或抑制剂就会影响酶的活性，而且这种作用常常具有特异性。但要注意的是激活剂和抑制不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂时却为另一种酶的抑制剂，而在高浓度时则为该酶的激活剂（如NaCl）。 ［实验材料与设备］ 器材：试管和试管架、试管夹、恒温水浴箱、烧杯、冰浴（冰箱）、沸水浴（电磁炉）、移液管。 试剂：0.2%淀粉-0.3% NaCl液、0.1%淀粉、1%淀粉-0.3% NaCl液、1%CuSO4、1%NaCl、1%Na2SO4、2%蔗糖溶液，碘化钾-碘溶液，斑氏试剂。 ［实验步骤］ 一、酶液的提取。 （1）唾液淀粉酶的制备。 二、酶的活性检验 温度对酶活性的影响。 管 号 1 2 3 0.2%淀粉—NaCl液（ml ） 3.0 3.0 3.0 稀淀粉酶 1.0 1.0 煮沸淀粉酶 1.0 温度处理（10分钟） 37℃ 冰浴 37℃ 温度处理（10分钟） 加KI—I2 2—3d 2—3d 2—3d 结果—反应速度 摇匀，保持各自温度继续反应，5分钟后每隔1分钟从第2号管吸取1滴反应液于白瓷板上，用碘液检查反应进行情况，直至反应液不再变色（只有碘液的颜色），立即取出所有试管，流水冷却2min，各加1滴碘液，混匀。观察并记录各管反应现象，解释之。 注：*2号管冰浴10分钟后分成二半、一半加碘试剂一半37℃保温10min后加碘试剂。 激活剂和抑制剂。 管 号 1 2 3 4 0.1%淀粉（ml） 2 2 2 2 1%CuSO4（ml） 1 1%NaCl（ml） 1 1%Na2SO4（ml） 1 蒸馏水 1 稀淀粉酶（ml） 1 1 1 1 保温（37℃）10分钟后 KI—I2 2—3d 现 象 试说明本实验第3号管的意义，并推出Cl-和Cu2+各是唾液酶的激活剂还是抑制剂？举例说明抑制与变性剂有何异同？ 三、的专一性 管 号 1 2 3 4 淀粉液（ml） 2 2 2 蔗糖液（ml） 2 酶液（ml） 1 1 煮沸的酶液（ml） 1 蒸馏水 1 保温（37℃）15分钟后 Benedict试剂（ml） 1 1 1 1 沸水浴2-3min 现 象 四、结果处理 讨论题：为何温度的控制是实验成败的关键？ 五、注意事项： 激活剂抑制剂实验中淀粉酶要最后加（为什么？） 加入淀粉时要小心，不要沾到试管壁；另外，摇匀时也不宜用力过猛，使淀粉溶液或淀粉粒过多地沾在试管壁上，这样会影响结果的观察，误差较大。 反应结果如不明显调节保温时间和酶液浓度。 温度结果要先准备好煮沸的酶液和冰浴再加入试剂。冰浴处理10分钟后的那支试管内的溶液要取约一半放在室温继续反应。 琼州学院实验项目卡 生命科学 系 生化 实验室 开设日期___年___月___日 实验项目 酶的特性 面向专业 课程性质 1、必修 2、选修 实验类型 1、还未开设的新实验 2、手段更新的实验 3、已开设过的实验 本实验学时数 3 实验分组概况 所用主要仪器 名 称 型号规格 数量 名 称 型号规格 数量 恒温水浴箱 1 电磁炉 1 试管及试管架 若干 移液管 2ml 若干 冰箱 1 大烧杯 （装冰块） 1 所用主要药品 名 称 纯度级别 数量 名 称 纯度级别 数量