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实验进展报告 一 中华补血草中总黄酮含量的测定 1 芦丁对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品20mg于1oomL容量瓶中，加60%的乙醇置水浴中加热溶解，冷却，用60%的乙醇定容至刻度，即为0.2mg/mL的芦丁对照品溶液，摇匀，备用。精密量取25mL上述对照品溶液，置于50mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，即为o.lmg/ mL的芦丁对照品溶液，摇匀，备用。 2 最大吸收波长的选择 精密吸取0.lm岁mL的芦丁对照品lmL溶液置于10mL容量瓶中，加30%乙醇使成smL，先加5%N咖O:溶液o.3mL，摇匀，放置6min，再加10%Al伽伪)3溶液0.3mL，摇匀，放置6min，加4%NaOH溶液4mL，用蒸馏水稀释到10mL，摇匀，放置15min，以空白试剂为参比，在波长400一600nrn范围内进行光谱扫描，确定最大吸收波长。 3 芦丁标准工作曲线的绘制 准确吸取0.lm留mL的芦丁对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.omL分别置于10mL容量瓶中，各加30%乙醇使成smL，先加5%NaNO:溶液0.3mL，摇匀，放置6min，再加10%AI伽03)3溶液0.3mL，摇匀，放置6min，加4%NaOH溶液4mL，各用蒸馏水稀释到10mL，摇匀，放置巧min，以第一管作空白，在最大吸收波长处测定吸光度值，以吸光度值为纵坐标，芦丁对照品溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，结果见图2.1 4 重现性试验 精密称取5份中华补血草粉末各lg于三角瓶中，加入50mL浓度为50%的乙醇溶液，超声处理20min，抽滤，重复提取一次(预备试验中经测定，重复提取一次后总黄酮已基本提尽)，合并提取液，定容至100mL。精密吸取lmL溶液置于10mL容量瓶中，按上述显色方法显色后，以空白试剂为参比，在最大吸收波长处测定吸光度值。 5 显色稳定性试验 将上述中一组测定后的样品溶液，按显色方法显色后，以空白试剂为参比，每隔10min后测定一次吸光度值，连续测定至第60min。 6 加样回收率试验 分别精密量取己知总黄酮含量的果皮提取液5份，分别加入一定量的芦丁对照品作回收率试验，按显色方法显色后，以空白试剂为参比，在最大吸收波长处测吸光度值，按下面公式计算回收率。 回收率=（测得黄酮含量一样品中黄酮含量）/加入芦丁对照品量*100% 7 样品溶液的制备及总黄酮含量的计算 准确称取中华补血草粉末lg于三角瓶中，加入5OmL浓度为50%的乙醇溶液，超声处理20min，抽滤，重复提取一次(预备试验中经测定，重复提取一次后总黄酮己基本提尽)，合并提取液，定容至100mL。精密吸取lmL溶液置于10mL容量瓶中，加30%乙醇使成5mL，先加5%NaNO:溶液0.3mL，摇匀，放置6min，再加 10%AI(N03)3溶液0.3mL，摇匀，放置6min，加4%NaOH溶液4mL，用蒸馏水稀释到10mL，摇匀，放置 15min，以空白试剂为参比，在 最大吸收波长处测吸光度值，由2.3得到的标准曲线回归方程计算出提取液中总黄酮的浓度，再按下列公式计算中华补血草中总黄酮含量。 总黄酮含量（mg/g）=CV/M 式中C:提取液黄酮类物质的浓度(mg/mL) V:提取液的总体积(mL) M:皱皮柑果皮粉末的用量(g) 二 结果 1 最大吸收波长的选择 将芦丁对照品溶液在UV一VIS分光光度计上进行波长扫描，发现在510nm处具有最大吸光度，与文献报道一致，故选择吸收波长510nm长。 2 芦丁标准工作曲线 3 重现性试验 重现性实验结果 样品 吸光度 平均吸光度 RSD（%） 1 0.225 2 0.220 3 0.219 0.223 1.83% 4 0.227 5 0.226 4 显色稳定性试验 稳定显色性实验结果 样品 吸光度 平均吸光度 RSD（%） 10 0.230 20 0.228 30 0.226 0.226 1.15% 40