原子力显微术对牛血清蛋白和胶原蛋白竞争吸附的研究.pdfVIP

广西师范大学学报(自然科学版) 2003年10月 GUANGXI JOURNAl。OFNORMAI，UNIVERSITY 原子力显微术对牛血清蛋白与胶原 蛋白竞争吸附的研究 于泳。，应佩青，靳刚 中国科学院力学研究所国家傲重力实验室．北京100080 由于自然界中的蛋白质是共存的，研制生物传感器、生物芯片和生物材料会遇到许多蛋白质竞争吸附 的问题．对蛋白质竞争吸附的研究可以更好地理解自然界中吸附的特性及影响．例如：在不同表面上，纤连 蛋白竞争吸附的研究，对细胞粘附的研究有很大的帮助．由Binnig等人“一发明的原子力显微镜可以观测 物体表面的形貌，其分辨率达到纳米级，为生物样品的观察提供了很大的帮助．用原子力显微镜得到了胶 原纤维在云母表面上的形貌图片”J．牛血清蛋白和硅表面的形貌也用原子力显微术进行了研究“…． 本文中，首先对硅片表面进行了亲水、疏水处理，然后采用原子力显微术研究了牛血清蛋白(BSA)和 胶原蛋白(Collagen)在亲水硅片表面和疏水硅片表面的竞争吸附． 1 实验部分 浸泡5 5 醇中保存．然后亲水表面用硅烷处理，使亲水表面制成疏水表面．在室温下．将亲水表面浸入含有二氯二甲 基硅烷(20％)和三氯乙烯(80％)混合溶液中7～8min．然后用乙醇、三氯乙烯交替清洗，制好的疏水硅片 仍在乙醇中保存．所有制好的硅片都在lh内使用． 用PBS(O．1mol／I．，pH一7．40)溶液，将BSA(购自Sigma)配成1 Manheim Biochmica)配成0．5 AutoProbeCPResearch min，取出后用去离子水清洗，再用氮气吹干．用AFM lagen溶液30 Probe Scientific Instruments，CA)观察．采用IC Microscope(Park Scientific (Park InstrumentS，CA)。实验结果是在2j℃室温．湿度jo％～60％下获得的． 2实验结果与讨论 2．1接触角的测量 用滴水法测量接触角．在25。c，将亲水、疏水表面用氮气吹干．再将去离子水(4uI，)滴在表面，用测角 仪测量接触角．亲水表面接触角为5。，而疏水表面接触角为80。． 作者简介：于泳(1967)．男，山东济南人．副研究员．博士．研究方向：电分析化学、蛋白质在表面的吸附及，傲重力科 学．E—mad：yuyonR电，imech．aⅢn 3JO 广西师范大学学报(自然科学版) 第2J卷 图1 蛋白质在疏水表面吸附的AFM图 a：蒲水表面小：BSAm胶原蛋白type J and nm J；d：胶原鹰白typeBSA的混f}溶液扫描范嗣--800nm灰整从黑到白为lo 2．2在疏水表面的竞争吸附 图1显示了疏水硅片表面、BSA、胶原蛋白(typeI)、和BSA与胶原蛋白(typeI)混合溶液在疏水硅 粒状，而胶原蛋白呈扭曲的长条纤维状，在图1 原蛋白(type1)混合溶液在疏水硅片表面吸附后的AFM图．图中显示胶原蛋白在疏水表面吸附很少．绝 争优势蛋白． 2．3在亲水表面的竞争吸附 5 图2(a)显示了亲水表面的AFM图．可清晰地看到硅表面的抛光痕迹，其起伏高度在0nm左右(最 4 大起伏高度为0．527 亲水表面吸附后的形状与在疏水表面吸附的形状相似，而胶原蛋白在亲水表面上吸附的数目要小于在疏 水表面上吸附的数目．图2(d)显示了BSA与胶原蛋白(type