中药新药样品中提取方法与有效测定的研究.pdfVIP

中药新药样品中提取方法及有效测定的研究 李国琴周颖黄雪惠 胡凯王新华 (杭州华东医药集团生物工程研究所 310011) 摘要目的：在平喘益气颗粒中用不同的提取方法提取样品中有效成分，并用薄层色谱和高效 液相色谱法分别检测样品中的人参皂甙和盐酸麻黄碱。方法(1)同一硅胶G薄层板上，以氯仿 流速1．2ml／min，检测波长为210nm，以外标法计算样品中的盐酸麻黄碱。结果：样品用不同的提 取方法提取时，对人参皂甙的TI C鉴别时斑点的明显的差别，而对盐酸麻黄碱的测定影响不大。 关键词 平喘益气颗粒 高效液相色谱法 薄层色谱 平喘益气颗粒是公司技术转让浙江医科大学临床药理研究所根据古方神秘汤含麻黄、苦 杏仁、厚朴、陈皮、甘草、柴胡、紫苏叶、再加入人参、穿山龙二味组成，有宣肺平喘、补肺益 气的功效的颗粒剂。在该样品中有效成分的相关测定，已有文献报道，本文根据本样品的具体特 性采用了不同的提取方法．并用薄层色谱鉴别样品有的人参皂甙和高效液相色谱法检测样品中盐 酸麻黄碱的含量。证明该方法有效地检测样品中的上述两种成分。 l 仪器及试药 硅胶G薄层板、紫外灯(365nm) 仪器：s瑚MADzu高效液相色谱仪 RX-C18柱250X4．6mm，5u 色谱柱：Aglient 水为重蒸水，甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯，平喘样品为本公司自制样品，对照品为中 国药品生物制品检定所提供。 2 实验过程 2．1样品中人参皂甙的鉴别 2．1．1鉴别方法： 取本品39，加40ral水饱和芷丁醇冷浸过液，超声提取30min，过滤，正丁醇液用氨试液洗 涤二次，每次40ral，合并正丁醇液，浓缩至千，再加水30ml，溶解，过滤，滤液加到已处理好 收集洗脱液，浓缩至干，甲醇定容至2ml，另取人参皂苷Rbl、Re、r91对照品，加甲醇制成每 验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各2(1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿一甲醇 在105℃烘约5分钟，分别置日光及紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱 的相应位置上分别显相同颜色的斑点与营、荧光斑点。图谱见图1--2 2．1．2提取方法的比较 取样品加水溶液，过滤，先用乙醚萃取，弃去乙醚，后用水饱和的正丁醇提取，取正丁醇液， 蒸干，点样，发现拖尾严重，而且萃取时乳化存在，比较难分层，而用水饱和的正丁醇冷浸过液 超声提取后，氨试液洗涤，上大孔树瞻庄，先用水洗，后用75％7-醇洗脱。蒸干乙醇液，用甲醇 液，用甲醇溶解点样。结果较好。因此选用该法。 2．2盐酸麻黄碱的含量浏定 2．2．1测定方法 照高液相色谱法(中国药典2000版一部附录VID)溅定 系统适用性试验：用十八烷基键合硅胶为填料，流动相：0．01mol／L磷酸二氢钾(用0．45urn 柱温为室温，理论塔板数按盐酸寐黄破计应不低于1000。 样品提取：精密称取本品约2．Og，用滤纸简包扎。置50ml锥形瓶中，加1mol／L盐酸40ml， 乙醚液，用lOml蒸馏水洗涤，将水层并入提取液，加浓氨水使成-蠡性，依次加入氯仿20、20、 20、20、20ml、振摇．静置，分取下层液，移至蒸发皿中，加盐酸lml水浴蒸干，用甲液溶解， 定容室25ml，经0A5um微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。分别棱密对照晶和供试品溶液20ul， 注入高效液相色谱仪，测定峰丽积，外标法计算，即得。 2．2．2方法的比较 (1)原来的提取方法 原来的提取方法：精密称取本品约2．og，置改良索氏提取器中，加30ml(1mll／L)盐酸浸泡 过夜，置电炉上加热回流4小时，冷却至室温，将提取液滤至分液漏斗中，用蒸馏水少许荡洗容 取液，合并乙醚液，用6ml蒸馏水洗涤，将水层并入提取液，加浓氨水8ml使成碱性，依次加入 于，将蒸干的样品用10ml流动相甲液在超声波清洗仪上使之溶解，定量转移至25ml量瓶，并 用llnl甲醇荡洗蒸馏瓶，荡洗液并入容时瓶中，再用甲液衡释至刻度摇均，经0．45tma微孔滤膜 过滤，作为供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10ul，注入高效液相色谱仪，测 定峰面积，外标法计算，即得。 原来方法采用lmol／L盐酸30ml在改良索氏提取器中提取样品中的麻黄碱，并对提取时问进 行了选择。结果见表】，实验证明，4小时已提取完全。表、 表1提