洗涤剂原料与成品急性毒理学LD50的HepG2细胞LC50替代检测方法的研究.pdfVIP

洗涤剂原料及成品急性毒理学 LD50 的 HepG2 细胞 LC50 替代检测方法的研究 1 1 1 1 1 2 2 1* 刘延一 周涛 魏儒杰 谢虹 王家春 胡守印  林尚鹏 吴志刚 1 华中科技大学同济医学院公共卫生学院 2 广州蓝月亮实业有限公司 *：通讯作者：greatwuzg@ (1) LD 是一项经典的急性毒性指标，通常用来区分和鉴别化学物的急性毒性 ， 50 如表1。但由于检测时需要饲养活体动物，工作环境要求特殊，而且检测通量低， 加上近来日益严控的动物保护措施，实际应用时受到限制，如无法随时用于对大 量原料化学物和成品的急性毒性的筛选和监控。 表1：经口急性毒性分级标准 小鼠一次经口 大约相当体重70kg人的致死 毒性分级 LD50 (mg/kg) 剂量 6级，极毒 1 稍尝，7滴 5级，剧毒 1～50 7滴～1茶匙 4级，中等毒 51～500 1茶匙～35g 3级，低毒 501～5000 35～350g 2级，实际无毒 5001～15000 350～1050g 1级，无毒 15000 1050g 为解决 LD 方法的应用限制，本研究提出了以 HepG2 细胞 LC 替代 LD 的研 50 50 50 究思路，通过分别检测洗涤剂原料化学物和成品 LD 和 LC ，经统计分析验证其 50 50 59 替代方法的准确度。 一、 实验方法 1、洗涤剂原料化学物和成品LD 检测 50 所有洗涤剂原料化学物和成品 LD50 检测工作由广州市疾病预防与控制中心 按照标准方法完成。 2、洗涤剂原料化学物和成品LC50 检测 所有洗涤剂原料化学物和成品LC50 检测实验方法参照卫生部“十二五”规划 (2) 教材《环境卫生学实习指导》 ，这是改良后的MTT试验。 2.1 HepG2细胞分组 空白组：只加入培养液，不加入细胞和染毒物。 对照组：加入细胞和培养液，不加入染毒物。 研究组：根据预实验结果，分别配制七个剂量的洗涤剂原料化学物或成品 DMEM溶液，尽量保证50%细胞抑制率上下均匀分布。 质控组：浓度为 50μmol/L 的 CdCl 溶液，细胞抑制率为 52%，许可波动控 2 制在5%以内。 2.2 实验操作 （1）将复苏的细胞经过几次传代培养使其细胞状态稳定之后，可以用来做