猪基质金属蛋白酶酶联免疫分析(MMP9ELISA).docVIP

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猪基质金属蛋白酶酶联免疫分析(MMP9ELISA).doc

猪基质金属蛋白酶酶联免疫分析 ELISA)盒使用说明书 预期应用 ELISA法定量测定猪血清、血浆、唾液、细胞培养物上清或其它相关液体中MMP-9含量。 概述实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定中水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入抗原、,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的呈正相关。用酶标仪在nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。 试剂盒组成 酶联板:一块 标准:瓶,稀释液稀释50pg/mL,625 pg/mL,312.5 pg/mL,其原液直接作为最高标准浓度,样品稀释液稀释液ml/瓶稀释液1×10ml/瓶稀释液1×10ml/瓶l/瓶(1:100)临用前以抗体稀释液A1:100稀释。 检测溶液B:1×120ul/瓶(1:100)临用前以抗体稀释液B1:100稀释。 底物溶液:1×10ml/瓶。 浓洗涤液1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 终止液1×10ml/瓶(N H2SO4)。 的采集及保存 -20℃,且应避免反复冻融1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。操作步骤 待测样品孔ul,轻轻混匀,37,分钟甩干每孔加100ul,37℃,60分钟。洗板3次,350ul/甩干。 每孔加100ul,37,0分钟,洗板5次,甩干。依序每孔加ul,37℃避光显色分钟依序每孔加溶液50ul,终止反应。用酶联仪在4nm波长依序测量各孔的光密度(OD值) 注: 1. 每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是最后加溶液及NH2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。 2.为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内。洗板方法 手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.4ml注入孔内,浸泡1-2分钟根据需要,重复此过程数次。 自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。计算以标准物的浓度为横坐标(对数坐标),OD值为纵坐标(普通坐标),在半对数坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以,即为样品的实际浓度。 乘以说明 1.-20℃(较长时间不用时);2-8(频繁使用时)。.浓洗涤液会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。

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