发酵培养基灭菌.ppt

?????发酵培养基灭菌 第三章 发酵工业原料及其处理 第一节 培养基的成分及来源 第二节 培养基的类型及选择 第三节 淀粉水解糖的制备 第四节 发酵培养基灭菌 发酵培养基灭菌 一、灭菌的原理和方法 二、湿热灭菌原理 三、培养基的湿热灭菌方式 四、灭菌时间计算与影响因素 三、培养基的湿热灭菌方式 1、间歇灭菌（分批灭菌、实消） 2、连续灭菌（连消） 由表可见，无论在理论上或者在实践上，与间歇灭菌过程相比，连续灭菌的优点十分明显。因此，连续灭菌越来越多地被用培养基的灭菌。 但是实际上，培养基在加热升温时（即在升温阶段）就会有部分菌被杀灭，特别是当培养基加热到100度以上，这个作用较为显著。因此，保温灭菌时间实际上比上述计算的要短。 严格地讲，在降温阶段也有杀菌作用，但降温时间短，在计算时一般不考虑。 排除冷空气的原因 问题 灭菌要达到杀死99.99%的细菌芽孢，有两种方法可以采用，一种是118℃灭菌15min，另一种是128℃灭菌5min。哪一种方法好，为什么？ 答：从理论研究和生产实践都可证明，在灭菌过程中，同时会发生微生物死亡和培养基破坏这两种过程，且这两种过程的进行速度都随温度的升高而加速，但微生物的死亡速率随温度的升高更为显著。 因此，对于同一灭菌效果，选择较高的温度、较短的时间，这样便既可达到需要的灭菌程度，同时又可减少营养物质的损失。 1、间歇灭菌（分批灭菌、实消） 定义：将配制好的培养基同时放在发酵罐或其他装置中，通入蒸汽将培养基和所用设备一起进行加热灭菌的过程，通常也称为实罐灭菌。（常用） 发酵罐 1）基本概念 240 160 120 80 时间（min) 0 50 100 150 温度 升温 冷却 保温 过程包括：升温、保温和冷却等三个阶段。 各阶段对灭菌的贡献：20%、75%、5% 从以上分析可知，灭菌过程中加热和保温阶段的灭菌作用是主要的，而冷却阶段的灭菌作用是次要的，一般很小，可以忽略不计。 此外，还应指出的是，应当避免长时间的加热阶段，因为加热时间过长，不仅破坏营养物质，而且也有可能引起培养液中某些有害物质的生成，从而影响培养过程的顺利进行。 各阶段对灭菌的贡献：20%、75%、5% 在实际生产中，也可能遇到所供蒸汽不足、温度不够高的情况，这时可以适当延长灭菌时间。 生产上甚至有用100℃蒸煮而达到彻底灭菌的实例。 如要做固体曲而没有高温蒸汽时，可将原料用100蒸汽蒸30min， 杀死其中的营养细胞， 但孢子与细菌的芽孢没有被杀死。 将蒸过的原料置于室温下过夜， 未被杀死的孢子便发芽生长，芽孢发育成营养细胞，再30min便可杀死。如此连续反复进行2-3次，亦可达到彻底灭菌的目的。 3）间歇灭菌的操作 间歇灭歇是在所用的发酵罐或其他培养装置中进行的，它是在配制罐中配好培养基后，通过专用管道输入发酵罐等培养设备中，然后开始灭菌。在进行培养基的间歇灭菌之前，通常先将发酵罐等培养装置的分空气过滤器进行灭菌，并且用空气将分过滤器吹干。开始灭菌时，应先放去夹套或蛇管中的冷水，开启排气管阀，通过空气管向发酵罐内的培养基通入蒸汽进行加热，同时，也可在夹套内通蒸汽进行间接加热。当培养基温度升到70左右时，从取样管和放料管向罐内通入蒸汽进一步加热，当温度升至120℃，罐压为1*105Pa（表压）时，打开接种、补料、消泡剂、酸、碱等管道阀门进行排汽，当然在保温过程中，应注意凡在培养基液面下的各种进口管道都应通入蒸汽，而在液面以上的其余各管道则应排放蒸汽，这样才能不留死角，从而保证灭菌彻底。保温结束后，依次关闭各排汽、进汽阀门，待罐内压力低于空气压力后，向罐内通入无菌空气，在夹套或蛇管中通冷水降温，使培养基的温度降到所需的温度，进行下一步的发酵和培养。 由于培养基的间歇灭菌不需要专门的灭菌设备，投资少，对设备要求简单，对蒸汽的要求也比较低，且灭菌效果可靠，因此，间歇灭菌是中小型生产工厂经常采用的一种培养基灭菌方法。 2、连续灭菌（连消） 1）定义： 将配制好的培养基在向发酵罐等培养 装置输送的同时进行加热、 保温和冷却 而进行灭菌。 连续灭菌时，培养基可在短时间内加热到保温温度，并且能很快地被冷却 因此可在比间歇灭菌更高的温度下进行灭菌 而由于灭菌温度很高，保温时间就相应地可以很短 极有利于减少培养基中的营养物质的破坏。 连续灭菌的基本设备有哪些 ？ 问题 发酵罐 蒸汽 蒸汽 冷却水 无菌培养基 配料罐 泵 加热塔 维持罐 冷却管 连续灭菌的基本设备一般包括（1）配料预热罐，将配制好的料液预热到60-70，以避免连续灭菌时由于料