中药保护急性胰腺炎大鼠肠粘膜屏障的系列的研究之四--肠道细菌移位.pdfVIP

中药保护急性胰腺炎大鼠肠粘膜屏障的系列研究之四 ——肠道细菌移位 李钢 陈海平王凯试 杭卅市中医院外一科(310007) acute 中药AA一2干预后的肠道细菌移位率与实验性重症急性胰腺炎(severe pancreafifis。SAP) 鼠肠道细菌移位率之间差异是否具有统计学显著性。 1．材料与方法 I．1实验动物与分组：健康sD一Ⅱ大鼠，由中国科学院上海实验动物中心提供(委托浙江省中医 药研究院实驻动物中心购入)，共18只，体重200±109，雌雄不限。在实验室用标准颗粒混合饲料喂 养1周后，隧rL分成三组(son=6。SAPn=6，AA一211=6)。动物禁食、自由饮水24hr，，开放乙醚麻 醉。改良式静舌荆胰被膜均匀浸润法造模，术后双侧腹股沟皮下注射生理盐水2ml／lOOgw，饮水，保 续给药至48hr．；SAP组等量双蒸水灌胃；SO组仅模拟手术创伤。 1 2主要试剂：牛磺胆酸钠由Sigrur公司提供；异硫氰酸荧光素FITC(进E1分装)，最大激发波长 495nm，最大发射波长490—590rma；大肠埃希氏菌ATCC25922，由浙江省卫生防疫站提供。 1．3主要仪器：Olympus万能显微镜，岛津AEL一200电子天平，孵箱。 1．4细菌移位观察： 1。4．1荧光菌标记：参照Wells介绍的方法，用兀Tc直接标记大肠杆菌ATCC25922，细菌复苏、 增菌后FITC标记，37℃，震荡培养过夜，在万能显微镜下确认为活菌和98％以上细菌被标记后，调终 浓度5×1矿efu／ml。 n=6、SAPn=6、“一3n=6)，采血处死，按无菌操作分别留取肠系膜淋巴结、胰腺、肾 大鼠6只(sO 脏、脾脏、肝脏等器官，一20。C冻存待测。测定前各组织无菌生理盐水冲洗、滤纸吸干、称重、作10％组 织匀浆。 I．4．3标记菌检出：10％组织匀浆涂于载玻片上(每个标本涂2张玻片)，在Olympus万能显微镜 下观察(蓝光，激发光波长400nm)，低倍镜下(×100)数3个荧光菌最集中的视野，取均数。 1，5统计学处理：统计学处理应用SPSS软件进行，单因素方差分析(三组之间比较用f检验，两 两对比用t检验，方差不齐用纠正t’检验)；数据用x±SD表示，P0．05为差异有显著性。 2．结果 2．1标记菌检出：造模后48h，SAP组大鼠(n=6)肠系膜淋巴结、胰腺、肝脏、肾脏和脾脏组织中 均可检出荧光标记的细菌；SO组大鼠(n=6)仅有2个标本的淋巴结内检出荧光菌，其它腹腔内各被检 348 脏器组织中均未检出荧光标记的细菌，两组间比较差异十分显著(pO．ooi)。中药干预后AA一2组 太鼠中虽然各被检器官组织中大都也有细菌移人，但各视野检出的荧光菌较SAP组大鼠明显减少，统 Tab．1BacterialTranslocstionConditioniaD珊erent Group(X±SD aVS对照组PO．05．bVS组问P0．05 2．2统计结果显示： ①肠系膜淋巴结荧光苗检出P(0．001，SAP／ SO P0． P0．01，SAWAA一2P0，01，从一2／S0 05。 P ②胰腺组织荧光菌检出P=0．027。SAP／SO 0．01，SAP／AA一2P0．05，从一2／SOP0．05。 P( ③肝脏组织荧光菌检出P=0．001．SAP／SO 0．01，SAP／AA一2P0，0l，AA一2／SOP0，05。 BacterialT’andO曲tiOn Fig．1