小鹅瘟蜂胶佐剂灭活苗的研究.pdfVIP

小鹅瘟蜂胶佐剂灭活苗研究 李琳’ 王楠’ 辛英’ 姚新华1齐伶俐2 1．吉林省兽医科学研究所 2．白城桃北区动物卫生监督所 摘 要：小鹅瘟蜂胶佐剂灭活苗是以小鹅瘟标准毒株和小鹅瘟长春地方株加蜂胶乙醇浸液为佐剂制备的灭活苗。该疫 苗对小鹅有良好的安全性和免疫原性，每只接种0．3ml，免后5天即产生坚强的免疫力，近期保护率(5～45天)为100％。 小鹅瘟(GP)是目前危害养鹅业最严重的疫病之一，为了防治本病，国内已经研制出几种疫苗来进 行免疫，如小鹅瘟弱毒苗、小鹅瘟灭活苗、小鹅瘟抗血清等，但这几种疫苗都有各自的缺陷。因此，我 们进行了小鹅瘟蜂胶灭活苗的研究，以获得令人满意的结果。 一．材料与方法 1制苗用种毒 小鹅瘟标准毒株和小鹅瘟长春地方株 2灭活剂及纯化剂 甲醛(分析纯试剂) 95％乙醇(分析纯) 3试验所用鸭胚 为9～10日龄鸭胚由本所自行孵化提供 4佐剂 蜂胶，一种天然的免疫增强剂与免疫刺激剂，购自吉林养蜂所，4C冰箱保存备用。 5试验动物 3日龄健康雏鹅。并在试验前进行血清效价检测无小鹅瘟抗体 6培养基 基础肉汤培养基 7小鹅瘟蜂胶佐剂灭活苗的制备 抗原的制备：用9～10日龄的鸭胚分别对小鹅瘟标准毒株和小鹅瘟长春地方株进行繁殖，培养4批 次，制备抗原共计1200ml，每批次均作病毒毒价测定。ELD50≥lO一6／O．2ml 小鹅瘟抗原灭活与安检：对制备出的小鹅瘟抗原用0．3％甲醛进行灭活，放置37C灭活48h，其间要 不时搅拌·之后，对灭活抗原进行过滤，除去蛋清等杂质，用肉汤培养液进行菌液检查，将培养基放于 37C培养三天，检验无菌后将灭活抗原放置4C冰箱待用。 蜂胶的纯化：将每批次蜂胶均需做纯度测定(％)，纯度测定方法及蜂胶纯化按《兽医生物制品 学》方法进行。所用蜂胶纯度均应大干50％。 疫苗的配置：将小鹅瘟灭活抗原与蜂胶乙醇液在无菌条件下按一定比例混合，用电动搅拌机低速搅 拌均匀，成黄色或褐色混合悬液，无菌条件下分装于100ml灭菌瓶内，加塞，贴签，封盖，40C冰箱内保 存备用。 疫苗的检验：a无菌检验：每批次疫苗取样，接种于基础肉汤培养基中，37(2培养48h，无菌生长者 为合格。b安全检验：任取三个批次疫苗，3倍皮下注射3日龄雏鹅，每批5只，隔离饲养观察14天。c稳 定性检验：将不同批次的疫苗随即取样，分别置于室温和4C冰箱，定时观察其物理状态，最长至12个 一120— 月。 疫苗中和抗体消长规律测定：取60只经测定无母原抗体的健康3日龄小鹅，分3组，在免疫前采血， 提出血清放置4C冰箱备用；再取3批次疫苗免疫3组小鹅，每只鹅免疫剂量为0．3ml，在免后3、5、6、 ELD，。值之差做为中和指数，表示其中和抗体消长规律。 二．结果 1安全性试验 3日龄的雏鹅皮下注射疫苗lml／只，注射后，雏鹅均健康存活。 2稳定性试验 室温条件下放置1个月或4℃下放置lfg不分层，但可能出现少许沉淀，此为正常现象。 3中和抗体消长规律测定 用不同时间所采小鹅血清做中和试验，测得中和抗体最早产生时间为第6天(中和指数为1．5)，中 和指数有所增长l在免疫后30天中和指数最高(中和指数为2．5)，到45天疫苗仍有免疫力。 三．讨论 l根据试验可知，该疫苗质量稳定，易于生产，安全可靠，疫苗免疫6天后，免疫保护率可达 100％，免疫效果良好。 2该疫苗安全可靠，3倍剂量接种雏鹅，雏鹅均健康存活。由于该疫苗采用的是蜂胶作为佐剂，蜂胶 对机体组织几乎没有影响，而且对其有很好的保护作用，因此不影响雏鹅的生长、繁殖、无毒副作用。 3蜂胶作为一种免疫增强剂和免疫促进剂，可增强机体的非特异性与特异性免疫力，且本身具有很 强的抑菌抗腐作用。另外，小鹅瘟蜂胶灭活疫苗要比小鹅瘟油乳剂灭活苗产生免疫力的时间要早，5～7 天即可产生坚强的免疫力，而且在应用中，小鹅瘟蜂胶灭活疫苗要比小鹅瘟油乳剂灭活苗易于注射。 作者简介 李琳， (1979--)男，吉林长春人，吉林大学在读硕士，现吉林省兽医科学研究所工作。主要从事 禽病和分子病毒学研究；曾参与《无规定疫病区建设保障技术——小鹅瘟鹅副粘病毒的防治和诊断技术 的研究与应用》和《小鹅瘟病毒——抗体复合物疫苗的研究》等课题的研究。 王楠， (1977--)男