若干新合成的核苷类化合物的体外抗病毒活性的研究.pdfVIP

若干新合成的核苷类化合物的体外抗病毒活性研究 汤雁波，刘宗英，李玉环，蔡步林，李卓荣 (中国医学科学院中国济和医科大学医药生物技术研究所． 北京100050) [摘要】 目的：测定若干新合成的核苷类化合物的抗乙型肝炎病毒(HBV)体外活性。方法：利用乙型肝 炎病毒基因转染的人肝癌细胞系2．2 DNA)的含量 15细胞，检测细胞培养上清液中的乙肝病毒DNA(HBV 作为药物抗HBV效果的观察指标。结果：12个新合成的化合物中有7个在实验药物浓度下呈阳性结果。结 论新合成的化合物大都具有潜在的抗病毒活性，其中化合物25、26、32、34的活性优于对照药或与对照 药相当。 [关键词】核苷类化合物；抗病毒；乙型肝炎病毒 病毒类疾病是威胁人类健康并导致死亡的主要疾病，其中尤以乙型肝炎病毒(HBV)和人类免疫缺陷 病毒(HIV)的威胁最大。核苷类药物作为病毒类疾病的主要治疗药，近年来受到了广泛关注。什j于治疗 【bis(POM咿MPA】、依曲聪他平(FTC)[11。 呈现强抑制作用。但是，PMPA及PMEA的生物利用度较差，为提高其生物利崩度，通常将它们制成前药。 抗HBV药物已于2002年9月被FDA批准上市。 发生耐药。泰诺福书DF应用于临床后没有引起新的耐药性突变．目前临床上已经存在的耐药突变中，K65R 株的优势明显。 作为治疗乙肝的常用药，拉米夫定用药一年后，会有24％的病人出现耐药，四年后出现耐药的病人可 达70％。阿德福韦二吡呋酯相对于拉米夫定其耐药性大为降低。实验显示，48周之内病人不会对阿德福韦 突变株仍会对拉米夫定、FTC等保持敏感口l。 由此可见，PMPA及PMEA是非常理想的抗HBV／H1V药先导物。 研究。 1材料和方法”1 目标化合物，由实验室自己合成。 对照品PMPA、PMEA，由实验室自己合成。 对照药泰诺福韦DF，由实验室自己合成。 2．2．15细胞，由美国Mount 医药生物技术研究所病毒室引进后自行传代培养。 DNA含量的标准及HBV杂交的探针。 Psp65．2HBV质粒为构建，用于作为HBV 1．1药物对细胞毒性试验 2．2 5％C02培养 15细胞{肖化，配制成每毫升Io万个细胞接种细胞培养板，96孔板每孔1009l，37C 养板，每浓度4孔，每4天换同浓度药液一次，同时设无药物细胞对照组。以观察细胞病变为指标，8天 ¨9 显微镜下观察细胞病变，完全破坏为4；75％#2 3；50％N 2；25％N 1；无病变为0。计算每浓度药液平均 细胞病变程度。按Reed＆Muench法计算半数有毒浓度(TD50) (50-8)的抑制百分数 TDso=Antilog[(109B+ ×C)】 (A—B)的抑制百分数 A净50％药物浓度，1妊50％药物浓度，C=log稀释倍数 1．2药物对病毒抑剖试验 每毫升10万个2．2．1 4C 5细胞接种96孔细胞培养板，每孔loo}tl，375％C02培养24小时，加入药物， 同时设细胞对照组，4天换原浓度药液或对照培养液一次，8天时收获培养液，细胞裂解后按分子克隆实 验技术方法提取HBV DNA。各样品斑点杂交、放射自显影、测量各杂交点的吸光度(A)，利用标准曲线 的回归方程计算细胞对照及给药组的HBV DNA含量后，计算抑制率及半数有效浓度(IC50)。