单克隆抗体在动物病毒性传染病的研究中的应用.pdfVIP

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 单克隆抗体在动物病毒性传染病研究中的应用 刘建文，涂长春 30062) (军需大学军事兽医研究所病毒学研究室，1 单克隆抗体是由预定免疫小鼠的脾细胞与能在体外无限生长的骨髓瘤细胞融合形成的具有双亲特征 并因此于1984年获得医学诺贝尔奖。此后。单抗的研制与应用已成为医学、兽医学、生物学、农学和食 品卫生等领域的研究热点。目前研究的重点在于如何将特定的单抗创造性地应用于不同领域而实现其应用 价值。 1、单克隆抗体技术的基本原理：小鼠骨髓瘤细胞能在动物体内外无限繁殖和分泌无抗体活性的免疫球蛋 白，而免疫小鼠脾细胞具有产生抗体的能力，但不能无限增殖。采用融合剂(PEG或二甲基亚砜等)将这 两种细胞融合成杂交瘤细胞，这种杂交瘤细胞具有亲代细胞的主要特征，既能在人工培养或动物体内无 限增殖，又能产生特异性抗体，可通过有限稀释法经筛选培育成由单个细胞增殖而成的克隆株。该克隆 细胞株如不发生变异，就可大批量地生产高特异性和高纯度的单克隆抗体。 2、单克隆抗体的优越性：单克隆抗体技术作为一种极具潜力的生物技术，不仅可与基因工程媲美，而且 可与基因工程配合应用，发挥更大的作用，这是由它们的下列优点决定的。 2．1目的性明确：人们可以在动物体内或体外按自己的需要生产不同类型的单抗。任何抗原、半抗原， 包括各种细菌、病毒、激素、酶类、氨基酸序列、核酸，还有其它异体蛋白或糖蛋白等均可以用来免疫动 物，利用杂交瘤技术获得相应的单抗。至今国内外已经制备出各种病毒、细菌、支原体、霉菌、寄生虫表 用作高度敏感性快速诊断试剂和高度特异性导向治疗药物。 2．2特异性高：单抗是针对某一种特定抗原或抗原上特定决定簇制备的，与其它抗原无交叉反应性。与 其它常规免疫血清相比，单抗的特异性高、效价高、质地均一，便于精制浓缩，应用单抗可以提高检测方 法的敏感性和特异性。同时，它又可作为提纯抗原、制备疫苗、生产生物制剂和用于基础研究的重要手段。 2．3生产简单，易于标准化：一旦选育成功一株高效价的杂交瘤细胞株，经鉴定合格后可置液氮中长 期保存。如不发生变异，染色体不丢失，就可长久源源不断地大批量生产高特异性和高纯度的单抗。鉴于 单抗有着极广泛的实用价值，在世界上正形成一个颇为热门的新兴产业。 3、单抗在动物病毒性传染病方面的应用现状：从八十年代至今，研制单抗一直是兽医界研究的一个热门课 题，研制成功的单抗所针对的抗原来源和种类已覆盖了大多数常见传染病，尤其在病毒方面，单抗在病毒 抗原结构的定位、中和表位分析、免疫学诊断和抗病毒治疗方面已得到或正在进行广泛的应用。 3．1单抗对病毒抗原结构与抗原表位的研究：病毒的蛋白结构与功能的关系是近年来研究的一个热点。 抗原表位是免疫原引起免疫应答以及与单抗产生特异性反应的基本结构单位，是由一段氨基酸残基形成 的。单个氨基酸的置换就会引起抗原位点的改变，从而导致抗原性质发生戏剧性变化。以往的研究进展缓 慢，虽然通过氨基酸序列或核苷酸序列的分析可以确定一个蛋自的结构，但只有借助单抗才可弄清不同结 p国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 构所具备的生物学功能。 护性抗原蛋白。VanRi]n等(1993)甩13株抗CSFV单抗对CSFVE2蛋白的抗原结构进行了系统分析。 在意义。马刚用制备的8株抗CSFV 该区域可能是CSFVE2蛋自上的一个新的抗原表位。 从分子生物学水平上对IBV进行分型提供了可靠的依据。 针对上述蛋白的多种单抗，但是大多数是抗N蛋白的，利用N氍自的单抗来研究N蛋白的抗原结构，有 洲PRRS分离株至少存在一个各自的独特型表位，另外至少有3个表位为北美和欧洲分离株所共有。 发现对PRRSV诊断试验的建立，尤其是PRRSV分离株基因型鉴定方面很有价值。 许多学者在研究口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋自及抗原结合位点的基础上，致力于对氨基酸定位研究。 用一系列抗FMDVAIO的单抗通过交叉中和试验发现某些变异的氨基酸残基是中和性抗原位点的组成部 秩型间及型内株间交叉保护小而抗原结构不断变异做了明确解释。 3．2单抗在免疫学诊断上的应用：单抗的诞生是免疫学上的一个里程碑，因其具有高度的同质性和高度 特异性等常规免疫血清无法比拟的优点，使它成为检测病毒抗原和抗体的最佳生物探针，加