西臧扎布耶查卡盐碱湖极端酶资源的研究.pdfVIP

西藏扎布耶查卡盐碱湖极端酶资源研究 曾艳马延和‘ 中科院微生物所极端环境微生物实验室北京100080 Q文摘鹭‘ 晌妖 引J、本论文尝试通过非培养的方法从盐碱湖土壤样品中获得极端酶资源。我 们首先提取了盐碱湖环境样品中的总DNA，然后利用环境总DNA建立了环境DNA 文库(metagemoelibrary)，最后通过测序和PCR方法从文库中筛选酶基因或 基因，目i段。对于盐碱湖土壤我们首先进行了透析操作，以除去土壤中盐分并且使 土壤粉末化，然后用液氮冻融方法尽可能完全的使所有细胞裂解，接着利用CTAB 和PVPP结合的方法除去土壤中的腐殖质成分，最后得到了高纯度的DNA样品。 经16SrRNA检测样品中包含了古菌及细菌的DNA，限制性酶切试验证明DNA 纯度可以用作分子生物学操作。将所获得的DNA样品经超声波打断后用K1enow DH 酶末端补齐连接到pUCl8质粒，转化E．coli10B，建立插入片段为3-6kb的 环境基因文库，得到约10，000个克隆。对阳性克隆质粒酶切分析，90％以上的