第十章 重组DNA的构建、筛选及鉴定分析.pptVIP

第十章 重组DNA的构建、筛选及鉴定分析 1. 重组DNA导入宿主细胞 2. 重组子的筛选 3. 阳性重组子的验证与分析 mRNA差别显示技术 在寻找新基因工作中起到积极的作用 发育机理研究 杂种优势机理研究 二 重组DNA的构建 2 粘性末端分子的连接 相同的粘性末端，在进行连接时，这两个 DNA 片段在 DNA 连接酶作用下就可以共价地连接起来，形成重组 DNA 基因枪法，又称微弹轰击法是利用高速运行的金属颗粒轰击细胞时能进人细胞内的现象，将包裹在金属颗粒表面的外源 DNA 分子随之带人细胞进行表达的基因转化方法。 宿主细胞 转化的目的 一是大量产生重组 DNA 在完成连接反应后，重组 DNA 往往只有纳克级的量，不易操作和进一步分析 二是对重组 DNA 进行纯化。在构建重组 DNA 过程中很难保证体系中不污染其他的 DNA 分子 第二节 重组子的筛选 一、遗传表型筛选法遗传表型筛选法 利用抗药性基因的筛选方法 b一半乳糖昔酶显色互补筛 利用抗药性基因的筛选方法 抗性标记直接筛选法 载体 DNA 上携带有宿主细胞敏感的抗生素的抗性基因， pBR322 质粒载体，它上面含有的氨卞青霉素抗性基因和四环素抗性基因 抗性基因插入失活筛选法 当用某种限制性核酸内切酶消化并在此位点插入外源目的