仪器培训-荧光定量PCR.pptVIP

提供两种不同的转子 36*0.2ml标准PCR管 72*0.1ml 首先，传统的PCR 检测方法在测定PCR 扩增产物前需打开反应管，容易造成产物污染，成为“假阳性”的主要来源。实时PCR 在扩增过程中动态检测，完全以闭管方式进行，不仅操作简便，也杜绝了产物污染源。 其次，传统PCR 都是在PCR 到达平台期后进行检测。PCR 经过指数期后，对反应条件的变化十分敏感，扩增到达平台期的信号强度重现性很差。实时PCR 方法则在指数扩增的开始阶段进行检测，此时样品间的细小误差尚未放大，因此具有重复性。 定量PCR技术的产生 1992年由Higuchi等人第一次报告：使用EB内插染料法插至双链DNA，经改装的带有冷CCD的PCR仪检测样品的荧光强度 PCR循环 = 双链DNA = 染料 = 荧光 后来用与双链DNA有更强结合力的SYBR Green I取代EB Part II 荧光定量PCR原理 开机操作： 打开电脑等待导入Windows XP系统 打开Rotor-Gene 3000主机电源，等待出现Ready状态提示。 打开Rotor gene 3000的盖子，将PCR反应管放入反应仓中，用空管填满反应仓。加上金属锁环（36孔），合上盖子。 注意事项： 务必在转轮中填满管子，不反应的位置用空管代替，以保证热反应系统内部结构的均一性 如果使用的是0