不同菌株发酵培养过程中脂肪酶活性的检测与分析.pdfVIP

● 第35卷总第93期 西北民族大学学报(自然科学版) V01．35，No．1 2014年3月 ofNorthw签t for Science) Journal Nationalities(Natural University March，2014 不同菌株发酵培养过程中脂肪酶活性的检测与分析 樊国庆1，雒晓芳2，王 瑾1，鄢圣林1，闰瑞祥1 (1．西北民族大学生命科学与工程学院，甘肃兰州730030；2．西北民族大学实验中心，甘肃兰州730030；) [摘要]从石油污染的土壤中分离、筛选出8抹微生物菌株．通过分析不同的PVA乳化液浓度，加入缓冲液的体 系，体系温度以及作用时间等不同因素对所产生的脂肪酶活性的影响．结果表明，多数细菌的最优酶活测定的反应条 rain． 件：控制乳化液浓度为30％，加入3mL缓冲液，在40℃下，反应20 [关键词]微生物菌株；发酵培养；脂肪酶；活性检测 [中图分类号】TS251[文献标识码】A 【文章编号】1009—2102(2014101—0058—05 脂肪酶也就是三酰基甘油酰基水解酶，其作用底物通常为油脂，通过催化作用可以使其产生脂肪 酸、甘油和甘油单酯或二酯[1]，这个反应通常是在油一水的界面上完成的【2|，如果底物能够分散均匀或 者是具有很好的水溶性，那么反应就油【7】．在环境治理方面，可以用脂肪酶的微生物修复功能将含有脂 肪酶以及其他成分的复合制剂来作用于海中的石油，就能够很好地治理海洋中的石油污染[8]8．脂肪酶 的应用广泛，在食品工业中，可以用于食品原料的生产【3]，也可以用来作为食品中的添加物质【4J，还可 以增强食品的品质[5]．在医药领域中可以作为诊断工具以及治疗药物[6]，在能源领域，可以用来生产生 物柴在有机合成中的应用，利用脂肪酶的催化反应特性，即立体选择性和区域选择性，反应条件温和、无 污染等等，可以用来合成一些功能强大的化合物【9】9．随着社会的发展以及科技的进步，脂肪酶的应用前 景必定会越来越好． 本试验通过分离选择得到了不同种的、高效的降解石油的菌株，并且对脂肪酶的形成条件和脂肪酶 活性的测定方法进行优化，这样有利于工业生产脂肪的研究以及脂肪酶酶活测定方法的多样性探讨． 1材料和方法 1．1 实验材料 1．1．1产脂肪酶菌株的筛选 污染土样中分离纯化得到，其分子生物学鉴定还有待于进一步进行． 1．1．2培养基 营养肉汤培养基，发酵培养基，分离培养基均按照微生物学实验[10】配制． 1．1．3试剂 1)橄榄油(Oliver oil)，化学纯，由江苏省南通市黔台商贸有限公司提供． [收稿日期]2014—02—10 [作者简介]樊国庆(1992一)，男(土家族)，贵州铜仁人． 一58— 万方数据 2)聚乙烯醇(PVA一124)，购自中国医药集团(上海)化学试剂有限公司． NaOH，无水乙醇，NaNO，． 1．2实验方法 1．2．1菌种的富集 h． 1)富集培养：挑取一环新鲜斜面种子，接于营养肉汤培养基中，置于恒温培养箱，37℃培养48 2)分离：从混浊的营养肉汤培养液中取样，用无菌水作10倍稀释倍数进行稀释．取稀释倍数分别 为10、100、1000的稀释液，各取0．2mL均涂布于分离平板，颠倒培养基，于恒温培养箱中控制温度37 ℃作用60h．如果细菌的菌落边缘能够出现黄色的透明圈，说明这种菌株能很好地降解油脂成分． 3)发酵培养：通过分离得到高效降油菌后，移取富集培养液1mL转移到发酵培养基中，于转速为 120 h． r／rain的摇床中恒温37℃，培养48 1．2．2脂肪酶活性的测定方法橄榄油乳化法 1．2．3脂肪酶酶活的