2014最新高中生物精品教学课件-5.2-多聚酶链式反应扩增DNA片段(人教版选修1).ppt

DNA合成的方向 子链由5′ 端向 3′端延伸 　　思考：DNA复制的前提是什么？ 体外扩增DNA 如何打开双链？ DNA复制的前提是______________； 用_________________方法 　　思考：DNA复制的前提是什么？ 体外扩增DNA 如何打开双链？ DNA复制的前提是______________； 用_________________方法 　　思考：DNA复制的前提是什么？ 体外扩增DNA 如何打开双链？ 双链的解开 DNA复制的前提是______________； 用_________________方法 　　思考：DNA复制的前提是什么？ 体外扩增DNA 如何打开双链？ 双链的解开 控制温度 DNA 分子的热变性原理： DNA双链 单链 DNA 分子的热变性原理： DNA双链 单链 复性（缓慢冷却） DNA 分子的热变性原理： 变性（加热80-100℃） DNA双链 单链 复性（缓慢冷却） 变性的目的： 复性的目的： DNA 分子的热变性原理： 变性（加热80-100℃） DNA双链 单链 复性（缓慢冷却） 变性的目的： 复性的目的： 解开双链 有利于引物Ⅰ和引物Ⅱ与两条单链的结合 DNA 分子的热变性原理： 变性（加热80-100℃） 思考：高温使DNA解旋，但普通DNA聚合酶会失活，__________________找到耐高温DNA聚合酶。 思考：高温使DNA解旋，但普通DNA聚合酶会失活，__________________找到耐高温DNA聚合酶。 托马斯.布鲁克 体外DNA复制的条件(PCR 反应的条件) ①DNA模板； ②分别与两条模板链相结合的两种引物； ③四种脱氧核苷酸； ④耐高温的聚合酶； ⑤ 控制温度，但不需解旋酶。 体外DNA复制的条件(PCR 反应的条件) （三） PCR的反应过程 1、PCR的反应步骤 1、PCR的反应步骤 　　PCR一般经历三十多次循环，每次循环可以分为三个基本步骤──变性、复性和延伸 （三） PCR的反应过程 ①变性（模板DNA解旋） 　　模板DNA加热至900C以上时，模板DNA双链解离，成为单链。 2、循环过程 靶序列 靶序列 PCR 循环第一步 ：加热变性 ②复性（退火） 　　温度下降到50℃左右，两种引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。 PCR 循环第二步 ：引物与靶序列退火 ③延伸 　　温度上升到72℃，在TaqDNA聚合酶的作用下，以脱氧核苷酸为原料，以母链为模板，按碱基互补配对的原则，合成一条新的DNA链 PCR 循环第三步 ：引物延伸 靶序列 靶序列 第1个 PCR 循环完成后 ：得到两个拷贝的靶序列 95℃变性 （1）PCR循环——变性 （1）PCR循环——变性 95℃变性 95℃变性 （1）PCR循环——变性 55℃复性 （2）PCR循环—复性 一、基础知识 （一）DNA分子的结构 一、基础知识 1、组成元素 （一）DNA分子的结构 一、基础知识 C、H、O、N、P 1、组成元素 （一）DNA分子的结构 一、基础知识 C、H、O、N、P 1、组成元素 2、基本单位 （一）DNA分子的结构 一、基础知识 C、H、O、N、P 1、组成元素 脱氧核苷酸 2、基本单位 （一）DNA分子的结构 一、基础知识 C、H、O、N、P 1、组成元素 脱氧核苷酸 2、基本单位 3、脱氧核苷酸结构 （一）DNA分子的结构 O O P O HO 碱基 O OH O O P O HO OH 碱基 5’ 3’ 3’ 5’ 碱基 脱氧核糖 磷酸基团 碱基 脱氧核糖 碱基 脱氧核糖 5’ 3’ 多脱氧核苷酸链结构简图 连 接 A T G C 连 接 A T G C 5端含磷酸基团 3端（含羟基） 连 接 A T G C A T G C 5端含磷酸基团 3端（含羟基） 连 接 A T G C A T G C 5端含磷酸基团 3端（含羟基） 3端 5端 4、DNA分子的双螺旋结构 4、DNA分子的双螺旋结构 　　① DNA分子是由两条反向平行的脱氧核苷酸长链（即一条链为3′→5′，另一条链为5′→3′）盘旋而成的规则双螺旋结构。 4、DNA分子的双螺旋结构 　　②脱氧核糖与磷酸交替连接，排列在外侧，构成基本骨架；碱基排列在链的内侧。 　　① DNA分子是由两条反向平行的脱氧核苷酸长链（即一条链为3′→5′，另一条链为5′→3′）盘旋而成的规则双螺旋结构。 　　③两条链上的碱基通过氢键连接起来，形成碱基对。碱基对的组成有特定的规律：即腺嘌呤一定与胸腺嘧啶配对，鸟嘌呤一定同胞嘧啶配对。 4、DNA分子的双螺旋结构 （二）DNA的复制 2、时期 3、场所 1、概念 2、时期 1、概念 由一个DNA形成两个完全相同的