丝组二肽(Ser-His)对牛血清白蛋白(BSA)切割作用地研究.pdfVIP

丝组二肽(Ser-Hi 陈晶，刘海，万荣，蒋宇扬，赵玉芬’ 清华大学生命科学与工程研究院 化学系生命有机磷化学国家教育部重点实验室．北京，100084 肽与蚩白的切荆作为生物化学中的热点之一．住蛋白部分台成、序钊测定、结构功能分析及疾病治 活性很高，而且特异性地在某些位点断裂，所以得剑了很J“泛的应川。但是这些酶只能在某些特定的条 件(如pH值、温度等)F使片i，而且蛋白酶切割蛋白的断裂位点相对较少，在一定程度上限制了其应 用。相对而言，化学切割试剂的研究与发展在这些年鬯上升趋势。在已有的化学切割试剂中．CNBr由下 活性较高，而且专一性地在Met的碳端切断，副产物较少等特点而得剑了较将遍的麻Ⅲ；Ⅱ!是这种试剂 割试剂也是研究的热点．但是这种试剂的断裂机理绝大多数是白由基机理，会导致萤白结构破坏。因此 进一步研究新的化学切割试剂具有很重要的意义。 Ser与[ti 剂谱带。本文中划以丝鲴二肽为模型，模拟天然蛋向酶，刚变性聚丙稀酰胺凝胶电泳的手段研究该-Ak 对蚩白的切割作刚。得到如下结果： 1．PH值与温度对切割的影响 使刚Britton—Robi 4．0刮9 J{i J| 仆r，加Ser s样有报明显的原料带的消失，而相应的J空向实验没有明显变化，pH6．0为最住D 值：在pH4．0时．原料笈生臼身水解，产生一条水解带。在60。c保湍反廊50hr历，Df{50与6．0 的原料带都彻底消失，而7．0还有残余。(她幽) pH4．04．0 5．05．0 6．06．0 7．07．0 8．08．0 9．09．0 50。C，50h 60。C．50h 0(BR buffer)．Scr-His对BSA的埘削作}n |芏|pH4．0--9 2 缓冲液种类对切割的影响 s一1ris缓冲jjl：加缓冲液 JtlBR缓冲、柠檬酸一柠檬酸二钠缓冲、磷酸氢：钠一瞵酸二氢铺缓冲、Bi 0)，60。C 对比‘所有缓冲液均为p}16 F反惠24hr．实验_捉明、BR缓冲及磷酸盐缓冲对切割有明显 Bis—Tri Sel—His亡1￡才 的促进作刖．而柠檬限盐缓冲。j S缓冲作jH则相对较弱：不加缓冲液时(由r +蜒台帕IJ：闰’象口热科学堪令巨点☆舢 329 但相对BR缓冲与磷酸盐缓冲变化不明显。 3 再反应基团作州的研究 s 相似的绸丝_二肽(His-Ser)、丝丙_二肽(Ser—Ala)、丙}R二肽(A1a—Hi s)、丝氮酸、组氨酸、丝氨 酸甲酯、乙醇胺(其相似性见幽3)、二乙醇胺及三乙醇胺为对照．研究它W J对BSA的切割作州(与 BSA按1：l配比，浓度与以上反应相同，在50。CF反麻lOOhr)。在实验中发现： (1)住反麻lOOhr后，Ala—Hi 碳基侧链的羟基是Ser—His具有切割活性的必须官能团，而His残基则增强了其切割活性。 其切割活性也不是由这两种物质引起的。 活性．说明_二肽碳端的酰铵楗与羧基对其切割活性有一定贡献。 用也有很重要的影响。 实验证明在一定的pH值范围内，该二肽对牛血清白蛋白具有