心脏组织血管紧张素Ⅱ形成双途径的转基因的研究.pdfVIP

94l· eN0s nRNA表达。1NF时间依赖性地诱导内皮细胞NO的生成。 5．原癌基因为了在分子水平上进一步探讨引起上述变化的基因机制，我们应用免疫组化(ABc 法)法和原位杂交法结合图像灰度定量处理处理观察了c一如l、c一如t等早期反应原癌基因表达柏变化， 结果发现(^Bc法)田盯(20 h时达高峰，以后逐渐 ng／mI．)作用12b后c一向l和c一且m表达明显增强，24 h逐渐回落。c一 杂交，结果发现经1NF作用4b开始c一如表达已明显增强，12—24h持续高表达，24 7 廊的表达与细胞表面的Fn表达间呈显著的负相关(Y=一9．012 由此可见，此类基因在大剂量|IT啊引起体外培养的血管内皮细胞的早期损伤的发生上有重要意义，它可 能对其它各种决定细胞损伤表现的特异性基因的调控起着一个。开关”柞用。 的培养内此细胞中用电镜观察、流式细胞仪检测凋亡细胞峰(H和Ann“inv双染色)、11慨L染色、硼A 碎片的梯形电泳等方法证实在高浓度的1T师(60ng／mI．)作用下培养12h后即可导致确ⅣEc凋亡，此 作用无明显时间一效应和剂量一效应依赖关系，凋亡仍然发展。与此同时，凋亡相关基因Bd一2n皿NA 8(肥c法)表达均增强，因此 的表达(No曲唧bh)抑制，Fas矾NA的表达增强，n叩、淄pa孵3、侧叩哪e nE引起的凋亡，其信号可能沿F日—·FADpca!币∞e8一cagpa∞3级联放大途径传递。 上述结果表明，应该重视|IT忸引起的光镜下不易发现的徽血管内皮细胞代谢的损伤和功能障碍，此 种损伤虽受多种基因组成的复杂“网络”控制，但是原癌基因c一向、c—im的表达加强在其早期调控中 起“开关”柞用，高浓度的曰吓可引起内皮细胞捅亡，细胞凋亡过程受基因调控，一旦启动，即无法逆转，上 述变化是很多疾病发病中的共同环节。 *国家自科学基金；美国中华医学基金资助 心脏组织血管紧张素Ⅱ形成双途径的转基因研究 陈兰英 (中国医学科学院中国协和医科大学心血管病研究所阜外心血管病医院，北京100037) 转基因动物自1980～1981年产生后，迅速发展。它克服了物种之间的生殖隔离，实现了动物物种之 间遗传物质的交换和重组，这不仅为遗传物质的研究提供了新的手段，丰富了物种的基因库，也扩太了生 命科学的视野。由于转基因动物技术具有分子及细胞水平操作、整体表达的特点，使得人们能从更完整 的系统中去认识生物分子的作用，现已广泛应用于医药、农业及生物学领域。在医学领域已用于遗传病、 肿瘤、心血管疾病、免疫性疾病的研究，包括建立疾病的病理模型，探讨其病因、发病机理和基因治疗方 法，研究基因表达调控以及进行药物干预和新药的开发实验等。建立疾病的转基因动物模型是转基因动 物技术应用于医学方面的一个重要研究内容。转基因技术可以在动物原来遗传背景的基础上，通过改变 某种基因的表达水平，以建立人类疾病的动物模型。这种模型产生疾病的原因清楚(由转入的外源基因 引起)，模型动物症状单一，接近于病人症状。在人类遗传病研究方面对单基因遗传病，已成功地建立了 镰刀状细胞贫血、囊性纤维化、家族性高胆固醇血症和腺苷脱氧酶缺乏症等的转基因动物模型，以研究单 个基因在遗传病发病中的作用。与此同时对于像高血压等多基因遗传病也广泛开展了建立转基因动物 模型的研究，并取得很大的进展。 高血压转基因动物模型的研究始于八十年代末。已先后建立了用于高血压疾病研究的多种转基因 动物模型。这些模型的主要优点：(1)遗传背景单纯、甚至仅有单基因异常，便于分析单一基因过度表达 或缺陷后对血压调节的影响。(2)可通过组织表达特异的调控元件(启动子或增强子)的设计，有目的地 检测外豫基因在所要观察的特定组织中表达。(3)是从体内来研究基因功能，尤其是可用于一些不艟在 人身上进行的人类疾病相关基因的研究；而在转基因动物体内