重组人胰岛细胞自身抗原69kD蛋白地研究.pdfVIP

第四届全国青年精细化工会议论文集 重组人胰岛细胞自身抗原69kD蛋白的研究 黄鹤 方芳 甘一如 (天津大学化工学院 300072) 簦剀上任双小位人册竹删甲衣地图／、朊峋础肥日爿饥z羁b，Kur童日LnlL，^b¨J， 病的早期诊断和联合筛查。方法：用PcR法扩增出编码hICA69的cDNA片段， 3PORT l质粒上，经DNA序列测定后，再插入到GST融合蛋白表达载体pGE】( 原性。结果：所获PCR产物已正确重组到PGEX--2T表达型质粒中，其在原核 融台蛋白具有免疫原性，并能应用于l型糖尿病病人血清中抗ICA69抗体的检 日基因工程技术获得的表达产物为重组ICA69抗原。这一抗原的获得．将有助 }尿病的预报率和确诊率。 胰岛细胞自身抗原69kD蛋白：GST融合蛋白：基因表达：糖尿病 I胞胞浆中的69kD蛋白是胰岛细胞的自身抗原之一．被命名为胰岛细胞自身抗 (ICA69)，是由483个氨基酸组成的多肽，与l型糖尿病细胞免疫和体液免疫 ’ j前认为抗ICA69自身抗体是1型糖尿病重要的免疫学标志和早期诊断指标之 19抗原的制各对l型糖尿病的早期诊断及其病因机制的研究都具有重要意义。 ： 生应用基因工程手段将ICA69编码基因在细菌中表达，生产用于临床检测的 。 月产品．继而建立间接ELISA法检测1型糖尿病人血清中抗ICA69抗体。 i方法 ． ：Ecoli Dtl5a和Ecoli 13L21宿主菌、pSPORT1和DG脒一2T质粒均为本宣保 捷岛细胞瘤(简称人胰瘤)双链cDNA系在本实验室逆转录合成与制各的。各 匈切酶、T,DNA连接酶、Klenow酶等购自GIBCO公司；PcR试剂盒为天津华美 Bind 4品：Advantage“FCR-PureKit购自Clontech公司；TAQ酶测序试剂 奄司产品；其他生化试剂均为进口或国产分析级产品。 ： LICA69全编码序列的扩增和克隆：以人胰瘤双链eDNA为模板，上引为5’一 分钟；经循环变性(92C1分钟、54C退火1分钟、72℃延伸3分钟)共30 ：延伸5分钟。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳进行初步鉴定后．K1enow酶补齐成 ￡特异性扩增片段，克隆到经Smal酶切的pSPORT1质粒中。通过蓝白斑筛选 爹1 蛆融合蛋白GST--hICA69的构建及在大肠杆菌中的诱导表达：按常规方法”1． 辔 ．：蕉 255 灞 落 麓 一 F；