产生光活杀虫剂α-三连噻吩的发根培养体系地研究初报.pdfVIP

产生光活杀虫剂Q～三连噻吩的发根培养体系 的研究初报 侯学文(1) 徐汉虹(1’ 赵善欢(1) 戚树源(2} (1)华南农业大学资源环境学院(广州。510642) (2)华南植物研究所(广州，51052Q) eTecta 摘要：本研究以万寿菊(Tagetes jJ 了万寿菊发根中n一《连噻吩的含量，发现其含量在6．10—7．73K／K．，r之间． 关键词；万寿菊；a一三连噻盼；发根。 erecta 万寿菊(TagetesL)中富含多聚炔类，这类化台物具有，“泛的生物活性，如强烈的杀线 虫活性，以及对细菌、真菌、杂草、害虫都有杀灭活性，甚至还具有抗HIV的活性：这一类化合物具有 ， 下其半衰期约为4h[1】。因此这类化合物符合作为安全、高效、低残留农药的基本特征，具有重要开发应 述情况，本研究采用发根农杆菌R1601转化万寿菊外植体，诱导建立发根培养体系．从而开辟一个植物 性杀虫剂的新来源。 1材料与方法 1 erecta 1材料：万寿菊(TaKetes rhizogenes)R1601具有宿主范围，“，诱导发根能力强的特点口I。 1．2方法 1．2．1发根农杆菌的培养：参照费厚满等【11的方法进行。 1，2．2万寿菊的转化及发根的诱导：参照费厚满等lI】的方法进行。 1．2．3万寿菊发根中d一三连噻盼含量的分析：取培葬的发根用自来水洗去残留培养基，用滤纸吸千，称 ． 取200mg鲜样，剪碎后再于匀浆器中匀浆．加入3ml丙酮于具塞试管中浸提3d，取浸提液经适当浓 u hypersil，5 缩后，用腮Lc进行分析：柱为ODS 0{一 1．5ml／min，检测波长为350nm。 2实验结果与讨论 繁 2．万寿菊发根培养体系的建立：万寿菊叶片经预培养排除杂菌污染后，3d即发现有伸长迹象，在创伤 切口处有愈伤组织出现，一周以后，逐渐从这些部位生长出发根，待其生长至2cm长度后。剪下放入 杀菌、选择性培养基中继续培养。随着时间的推移，万寿菊叶片能诱导出发根的数目逐渐增多。三周 后诱导率达到10嗍：出根数目从几条至{-数条不等，诱导出的发根生长活力也有较大差异，有的发 ’ 根生长迅速．有的发根在继代培养过程中渐趋死亡，挑选长势良好的发根进行继代培养。经10次继代 后，一个稳定的发根体系即建立成功。发根农杆菌转染植物材料，随着植物种类的不同，其转化出根 侯学文，男，1969年出生，现为华南农业大学资源环境学院博士后研究人员，主要从事植物次生代谢产物研 究．本研究为广东省自然科学基金(960429)资助项目。 率有相当大的差异，如绞股蓝转染率达94％Iq，栝楼转染出根率仅为5％【”，而本实验的转染率高达100％， 这说明不同植物种类对农杆菌R1601的接受程度是不同的，二者之间可能存在着信息与物质的交流， 有的抑制其转染，有的促进其转染，前者为优良宿主，后者为不良宿主。 2．2万寿菊发根的a一三连噻吩的含量分析：先用U一三连噻吩标准品求出其含量与峰面积的相关性， 连噻吩含量(I．1 g)，峰面积与n一三连噻吩含量高度