去甲斑蝥素诱导人结肠癌细胞凋亡地研究.pdfVIP

去甲斑蝥素诱导人结肠癌细胞凋亡的研究 彭枫魏于全雷松毛咏秋杨莉 出聆阚兵赵霞 姜愚 罗蜂邹立群王庆茹刘继彦．卢铀王广生 华西医科大学附属第一医院肿瘤生物治疗研究中心，肿瘤防治中心(四川610041) 床研究[6，7]已初步表明NaD对于原发性肝癌、血液系统肿瘤等有一定的治疗 作用。在治疗剂量下NCTD大大降低了班蝥素的胃肠道和泌尿系统的毒副作用， 不产生骨髓抑制，并有研究表明，NCrD还能促进正常人骨髓细胞DNA合成，从 而有刺激白细胞升高的作用[5，1o另外，NCTD成本低廉，因此是一种有应用前 途的抗肿瘤药物。 消化系统恶性肿瘤，特别是结直肠癌的发病率和死亡率在我国逐年上升，在 欧美等发达国家已占肿瘤死因第三位。不能切除的转移、复发的结直肠癌治疗上 则主要依赖于全身化疗的应用，但消化道肿瘤普遍对化疗药物不敏感。5一氟脲 嘧啶(5一Fu)是目前认为较有效的药物，但其单用有效率仅为11％～25％，合用甲 合用也未见到满意疗效。因此晚期转移复发结直肠癌的治疗仍是尚待解决的问 题，急需寻找新的更有效的药物和联合用药方案。一些研究表明，结直肠癌的发 生发展与细胞凋亡受抑制程度密切相关[10，11]。．因此，诱导结直肠癌细胞凋亡， 调节细胞群体趋势向平衡，是控制和治疗强直肠肿瘤的一个途径。 规律，对其作用的分子生物学机制作初步探讨，并就NCTD对肿瘤组织的作用作 一总结，为NCTD在临床上应用于结直肠癌的治疗的可行性提供一定的理论依 据。 材料和方法 154 为37℃的培养箱中。 剂，由王广生教授惠赠。取指数生长期的Col0205，于24孔培养板中培养，浓度2 同时问，取0—96小时不等，并设对照进行同步检测。 (1)形态学观察。台盼蓝拒染试验：细胞经0．4％台盼蓝染液染色后，用于光 用甲醇室温固定。Giemsa染液染色10分钟，于普通显微镜下观察细胞形态变化。 x 0．1％Triton100)作用30分钟，再进行细胞涂片。于荧光显微镜下观察其形态学 变化。 胶，放入水平式电泳槽中。每个加样孔加入15m上述处理后的样品及分子标记 物，于50V电压下电泳3小时，再用溴化乙锭染色15分钟，于紫外灯下观察电泳 后的DNA条带[13]。 细胞沉淀用lml低渗荧光染液PI重悬混匀，避光作用30分钟后用流式细胞仪 行细胞周期分析。 68小 别接种于几个培养瓶中培养，用不同浓度NCTD处理不同时间，Fas取0…4 物的检测： 155 分析Fas蛋白表达阳性率和平均荧光强度。 IgGl— 仪检测并分析mt—p53蛋白表达阳性率和平均荧光强度。 ‘ 式细胞仪检测并分析其表达阳性率和平均荧光强度。 4．Na巾对肿瘤组织的作用： 用机械法切碎制各单细胞，移入培养基中，培养板置于37℃，5％032下培养。24 小时取出培养板，肿瘤组织及细胞移入流式样品管，加入低渗性荧光染液PI，避光 作用30分钟后于流式细胞仪检测，分析每种肿瘤经NCTD处理前后的凋亡率变 化，结果以均数±标准差表示。 ‘ 结 果 1．NCID对Col0205的生长抑制作用及动态变化： 依赖关系。 2．N研D对Col0205凋亡的诱导 胞体积缩小，核致密或碎裂。胞膜完整，不规则，表面形成小泡状。经PI染色，荧 光显微镜下观察到核浓染，呈明亮的红荧光或核碎裂成小片状。而未经NCTD作 156 鲫 们 柚 co蛊盎里uI术