微生物降解多效唑农药修复土壤地研究.pdfVIP

微生物降解多效哇农药修复土壤的研究 裘娟萍 孙小燕 (浙江工业大学生物与环境工程学院，杭州310032) 摘要 从多效吐生产厂家的土坡中畜集获得能在多效吹为唯一破源培养基上生长的徽生物，经分离、 纯化、鉴定得2株假单胞杆菌和2株芽抢杆菌04种徽生物都以多效唆为破源，并彻底降解多效哇为 二氧化破，混合菌鲜lod降解多效吹76.9%。将降解菌施入土镶中.进行土坡再生实脸，结采降解菌 对污染土城具有良好的修复再生效果。 姜.询 多效咬 生物降解 土坡再生 1 引盲 多效哇 (Paclobutrazol)具有高效生长调节作用和广谱杀菌效应[I]。在我国已广泛应用于果 树、花卉及水稻、油菜、大豆等多种农作物上，“多效哇培养水稻壮秧技术”的推广，收到了控 长、促萦、防败苗、增穗增产等效果。但同时发现多效哇在高有机质的土壤中三年后尚残留 30%以上，W对后荐作物产生不良影响，对生产厂家周围农作物生长产生异常现象。多效哇的自 然代谢中间体植物吸收后有致癌作用[[61等，这些问题已引起人们广泛关注。鉴此，本文对微生物 降解多效哇作了初步探讨，通过筛选能彻底、高效降解多效哩的微生物，以尽快修复多效哩对 环境造成的危害，为人们合理广泛地利用多效哇提供参考。 2 材料与方法 2.1 实脸材料 2.1.1样品:多效哇 (Paclobutrazol)，本实验采用15%的可湿性粉剂 (浙江兰溪农药厂提供) 2.1.2 土样:采自兰溪农药厂排污口附近的黑潮土。 2.1.3培养基:(a)高氏1号培养基:见文献[3]0(b)无C高氏1号培养基:高氏1号培养基 中不加淀粉。(。)无N高氏1号培养基:高氏1号培养基中不加KNO,a(d)无C.N高氏1号培 养基:高氏1号培养基中不加淀粉和KN仇。(e)HCMM2胰蛋白陈培养基:见文献 4【]。以上培 养基中所用琼脂均为水洗琼脂。 2.2 实脸方法 2.2.1微生物的富集 从多效哇生产厂家废水排放口旁取土样，制成悬浮液，分别接种到含20(砂nli多效哇的无 碳源、无氮源和无碳氮三种高氏1号培养液中，摇床培养 ((30C,150r/nun)7d。以10%接种量 传代，重复5一6次。并跟踪观察微生物的生长情况。 2.2.2 降解菌的分离纯化 将传代六次的微生物接种到含和不含多效哇的HCMM2胰蛋白陈培养基上，30℃培养3一4d, 比较两种平板上微生物生长情况，把只在多效哇培养基上生长的单菌落进行分离纯化。 2.2.3 降解菌的培养 在含50pg/ml多效哇的无C高氏1号培养液中30C,109r/nin培养10d，用紫外分光光度计 法、高效液相色谱法测定多效哇含量、用瓦勃氏呼吸器测定法测定生长过程中培养体系中气体 变化 2.2.4 多效哩含量测定 2.2.4.1紫外分光光度计法测定 689 取1ml培养液，加人3ml丙酮1’〕，摇匀使其充分溶解剩余的多效哇，离心取上清液，用旋 转蒸发器蒸发至丙酮蒸干151。将剩余溶液用2x10m1的乙酸乙醋萃取，取有机相，用无水No,S认 脱水后倒人干燥的烧瓶中，旋转蒸发至3ml左右，用乙酸乙酷定溶至5ml，用柱层析净化f[el。用 乙酸乙醋对培养基的萃取液净化后作空白对照，用754一G紫外分光光度计在波长290nm下测样 品的吸光度。 2.2.4.2 液相色谱测定 称取A样品:41.78,B样品:49.78,C样品:56.2g,D样品:46.1g。用50m1,40ml乙酸 乙酷提取二次，用无水硫酸钠脱水，在50℃下降压浓缩至2m]，再用氮气吹干。用甲醇定容 10nli。用HP1100DAD监测器分析，柱温409C，样品保留时间为5.1m1，流动相为0.5nli/min(甲 醇:水二9;1)oHPLC由浙江省农科院环保研究所农药室测定。 2.2.5微生物生长过程中C02含量变化的测定 瓦氏呼吸器法，反应瓶中加样按表1所示。在30℃恒温水浴下震荡培养，每8h记录气压变 化 衰1 徽生物生长过程中气体含.侧定的加样衰 Tab.1 The~ 口.fordetermini叱thegasvariety恤.阮processofbacterkdgrowth 瓶号 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11