哺乳动物组织基因组DNA提取.docVIP

本科学生实验报告 姓名 陈明辉 学院 生命科学学院 专业 生物科学 班级08级A班 实验课程名称 分子生物学 指导教师及职称 倪娟老师 开课时间 2010至2011学年下学期 云南师范大学教务处编印 实验名称：哺乳动物组织基因组DNA提取Genomic DNA Extraction from Mammal Tissue 实验时间：2011-5-24 小组合作： 是○ 否○ 一、实验预习 实验目的： (1) 掌握动物基因组DNA提取的操作方法; (2) 掌握琼脂糖凝胶电泳的操作的方法。 Experimental Purpose：After the experiment is finished, students should be able to extract genomic DNA from mammal tissue, and to run an agarose gel. 实验设备及材料： Reagents and apparatus （1）Instruments： High speed refrigerated centrifuge（高速冷冻离心机）、 Glass homogenizer（玻璃匀浆器）、 Electrophoresis System（电泳系统）、 Ultraviolet transilluminator（紫外透射仪）、Ultra cold storage freezer（超低温冰箱）、Autoclave（高压灭菌锅）、 Pipettes（微量加样器）、Electronic balance（电子天平）、Acidometer（酸度计） （2）Material： Liver of rabbite （3）Reagents： Tris、SDS、EDTA、 HCl、 NaOH 、 Sodium acetate (NaAc)、 Acetic acid (HAc)、 Phenol、Chloroform、Ethanol、Isoamylol、TE buffer 、Protease K、RNase A、Agarose、DNA molecular weight markers 、Boric acid、Sugar、Bromophenol blue、Fluorescent dye (Gelview) 实验原理及实验流程或装置示意图： 实验原理： （1）本实验利用去垢剂SDS(十二烷基磺酸钠)是为了使蛋白变性并溶解细胞膜中的脂质从而导致细胞裂解，而细胞裂解物又常用蛋白酶K进行水解处理。 （2）随后用酚:氯仿进行抽提，以去除残留的蛋白质，这时蛋白质将进入有机相，或者假如己变性的话将呈现在有机相与水相之间。乙醇沉淀处理则可以浓缩DNA，同时去除核苷酸、氨基酸以及低分子量的寡核苷酸和肽。 （3）为了进一步保护DNA样品的完整性，通常需要在缓冲液中添加乙二胺四乙酸(EDTA)以整合Mg2+，这样将会减少脱氧核糖核酸酶(DNase)的活性，因为该酶必须在有Mg2+存在时才会起作用。 Experimental Principle: （1）The detergents SDS ( sodium dodecyl sulfate) is added to denature proteins and solubilize lipids in membranes leading to cell lysis . The cell lysate is often treated with enzymes that hydrolyze RNA and proteins. （2）Then they are treated with phenol and chloroform to remove the remaining proteins, which will either enter the organic phase or, if they had denatured, appear at the interphase. Alcohol help to concentrate the DNA while removing nucleotides, amino acids, oligonucleotides and peptides. （3）We can add the eathylene diamine tetraacetic acid (EDTA) to keep the integrity of DNA. EDTA can chelate Mg2+ and reduce deoxyribonuclea