植物组织培养综合实验2.pptVIP

植物组织培养综合实验 满天星组培快繁一 ------初代培养 实验目的意义 通过满天星等的茎尖培养获得完整的幼苗，学会茎尖组培快繁的基本原理和操作技术。 实验原理 茎尖离体快繁技术 植物的茎尖和腋芽在适宜的培养基上，在合适的激素条件下，其生长点分化形成大量芽并能形成良好的苗。苗经诱导可长出根而形成完整的植株，这就是茎尖组培快繁。此技术已广泛用来繁育那些不能形成种子进行繁殖或难以繁育的花卉杂交品种或其它具有重要经济价值的植物，由于病毒一般不侵入生长点细胞，因此，这种方法也广泛用来脱病毒获取脱毒苗。 理论基础 利用离体培养技术，将来自优良植株的茎尖、腋芽、叶片、鳞片等器官、组织和细胞进行离体培养。在短期内获得大量遗传性一致的个体的方法（技术）称离体无性繁殖，由于这种方式得到的植株群体来自一个单株（或一个单芽），它们的遗传组成相同，这些株群可称单株无性系或单芽无性系。 优越性： 繁殖速率快；育苗工厂化 本周实验内容 满天星离体快繁——初代培养 1 培养基的配制 2 外植体的采集及灭菌处理 3 接种与无菌操作 4 培养物观察 实验过程 整个实验分为三个相互衔接的阶段： 1、初代培养——建立茎尖无菌培养系统 2、继代培养——茎尖离体快繁 3、根的诱导及移栽——形成完整植株 初代培养 实验材料： 满天星或非洲菊带茎尖的苗 75%乙醇溶液和0.1%升汞溶液 需灭菌物品： 诱导培养基:MS＋BA 1.0mg/L（Ph5.8） 培养皿、吸水纸、解剖刀、长柄镊子等 实验操作 1、培养基的配制及实验器材准备 培养基： MS＋6-BA 1.0mg/L+3%蔗糖（Ph5.8） 实验器材： 吸水纸，操作盘（饭盒或培养皿）；镊子；剪刀；酒精棉球等。 超净工作台准备： 从田间获得的满天星枝条或幼苗，切取茎顶或带腋芽的茎段，用水反复冲洗，切取茎尖（2cm）或带腋芽的茎段，用70%乙醇溶液浸15秒，再用0.1%升汞溶液灭菌2～3分钟，用无菌水清洗几次，在无菌操作台上或接种箱中，逐层剥去外面的大叶，切取只有2～3个小叶的茎尖（0.5cm大小），接种于诱导培养基上，置于25℃的恒温下照光培养。 选材：材料类型、大小，年龄与发育状况等 修剪：去除较老和脏的叶片，尽量减小体积，减少污染 清洗：自来水冲洗，2％洗涤剂浸泡20分钟，清水冲洗 实验结果与分析 培养过程请进行下列观察和记录: 1、污染情况：内生菌污染？外源菌污染？ 2、茎尖诱导情况，分枝状况，诱导率。 3、幼苗生长状况：弱小？健壮？玻璃化？褐化？ 学习与思考 1、切取的用于接种的茎尖大小对诱导率有影响吗？为什么？如何根据实际情况进行外植体的切取？ 2、茎尖培养在实际生产中有哪些用途？ 3、观察实际结果并分析原因。 * * 植物组织培养的原理: 植物细胞的全能性. 离体快繁的应用 优良品种 脱毒种苗和无病毒苗； 特殊育种材料； 制种材料； 突变体； 基因工程植株； 离体保存种质； 濒危植物。 组织培养室 高质量的高科技农业 离体快繁的一般技术 材料的初代培养(无菌母株制备) 试管苗的增殖与继代培养（不定芽增殖） 试管苗的生根与移栽（完整植株形成） 再生植株鉴定 外植体的选择与消毒 2、植物无菌培养物的获得 灭菌：75％乙醇30-60s；0.1%升汞8-10分钟; 无菌水冲洗3-5次。 无菌修剪：用无菌镊子和剪刀进一步去除多余的叶片，依据需要切割成相应大小的茎段（带2-3个叶片）。 接种：无菌操作将处理好的材料接种于培养基上，2-3个材料/瓶 培养：25 ℃，光照培养 观察记录：污染，生长状况，分枝 实验室 无菌间 培养室