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狂犬病病毒核蛋白新发现保守线性B细胞抗原表位的证实
吕新军
中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒性脑炎室
目的 证实采用生物信息学分析预测的狂犬病病毒核蛋白新发现保守线性B细胞抗原表位的有效性。
方法 采用生物信息学方法预测狂犬病病毒核蛋白潜在的线性B细胞抗原表位。模拟狂犬病病毒核
蛋白线性B细胞抗原表位合成多肽,将合成肽与匙孔血蓝蛋白(KeyholeLimpehemocyanin,KLH)大
分子耦联作为免疫原。采用该免疫原免疫兔制备抗合成肽 “多克隆”抗体,免疫Balb/c小鼠通过经典杂
交瘤细胞技术制备抗合成肽 “单克隆”抗体。通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbentas
say,ELISA)、蛋白印迹试验(westernblot)、荧光抗体试验(fluorescentantibodytest,FAT)鉴定抗合
成肽抗体的生物学反应特性。
结果 生物信息学分析和抗狂犬病病毒核蛋白单克隆抗体抗原表位分析揭示的狂犬病病毒核蛋白线性B
细胞抗原表位在数量和定位方面存在明显差异。狂犬病病毒核蛋白152-164位氨基酸区段是生物信息学
预测的一个以前未曾报道的保守线性B细胞抗原表位。以KLH耦联的合成肽免疫2只兔,间接ELISA
检测显示兔血清内抗合成肽抗体滴度达到1∶200,000以上。Westernblot检测显示抗合成肽抗体识别
SDS变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdodecylsulfonate-polyacrylategelelectrophoresis,SDS)分离
的狂犬病病毒核蛋白。采用经典杂交瘤细胞技术获得2株阳性杂交瘤细胞系RVNP-mAb1-CL和RVNP-
mAb2-CL。RVNP-mAb1-CL杂交瘤细胞系腹腔接种Balb/c小鼠后腹水内产生的RVNP-mAb1抗体浓度
较高。采用亲和柱层析法纯化抗合成肽抗体,对纯化的抗合成肽抗体进行异硫氰酸荧光素(flouresceiniso
thiocyanate,FITC)标记。FITC标记抗合成肽抗体在FAT检测中能识别BSR细胞和犬脑组织内的天然
狂犬病病毒核蛋白。FITC标记抗合成肽抗体可能用于狂犬病实验室诊断。
狂犬病防控示范区建设研究
宋兴国 毛爱国陈方良 杜小鹏 郭斌
公安部昆明警犬基地
2004年以来,笔者单位在云南昆明市禄劝县崇德乡、帽山等六个自然村开展了工作犬驯养工作,按照
国务院颁布的 (中华人民共和国动物免疫法), (动物真谛疾病应急条例)和 (狂犬病防治技术规范)的规定
要求,我们在工作犬驯养的自然村周边开展了狂犬病防控示范区建设研究,现将研究报告摘要如下:
一.充分认识狂犬病对人民群众生命财产安全和经济发展带来的严重危害
(一)了解欧美发达国家对狂犬病有效防控的经验,树立狂犬病可防可控的信心
狂犬病在全球广泛分布,在欧美等发达国家,由于对主要传播此病的易感动物——狗、猫实行了科
学管理,狂犬病得到了有效控制,他们的主要精力已转入对野生动物 (蝙蝠和狼)发生和传播狂犬病进
行防控研究了。
(二)我国对狂犬病防控的基本情况 (云南为例)
我国近几年来国家加强了对狂犬病防控研究,但由于农村经济发展不平衡,广大农村的公益事业,
尤其是疾病防控体系还比较薄弱,对动物疾病防控工作更显薄弱,农村犬的狂犬病防控基本处于空白
状态。
上海市犬类狂犬病防控现状、问题及对策
刘佩红 屠益平 赵洪进
上海市动物疫病预防控制中心,上海201103
随着经济发展,上海犬只饲养量不断增加,2011年全市注册犬已超过25万条。上海狂犬病防治工
作始于晚清租界。1892年首次发现狂犬病后,上海采取了扑杀野犬、犬类饲养必须登记、犬只外出必须
戴口罩、有证犬必须注射狂犬病疫苗等一系列措施,并先后制修订了6次《犬类管理办法》,有力保障了
上海狂犬病疫情的稳定可控。21世纪以来,针对全国日趋严重的狂犬病疫情形势,上海进一步加大防
控力度,通过建立完善狂犬病多部门防控机制、实行养犬登记和年检制度、探索建立犬类电子标识信息
化管理、依法开展狂犬病强制免疫、加强狂犬病疫情监测、强化技术培
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