中药青龙爪抗HIV-1病毒实验研究.pdfVIP

2006 中华中医药学会防治艾滋病学术研讨会 中药青龙爪抗HIV-1 病毒的实验研究 刘兆梅 温瑞兴 马洪涛 北京工业大学生命科学与工程学院 北京 100022 通讯作者：温瑞兴教授 Email: rxwen@bjut.edu.cn 电话：010 摘要 目的 艾滋病已经成为人类前所未有的最具毁灭性的疾病，为防止艾滋病在世界范围 内继续肆虐,各国政府均努力加紧抗“艾”研究，至今,发达国家已投入了大量的资金及人力资源, 对HIV本身以及抗HIV 的药物进行了研究。我国对中草药抗病毒治疗认识已久，随着医药生物技术 的发展，加快了中草药抗病毒的研究进展迅速，人们对有效成分进行了大量的研究，成功的找到 了多种类型的抗HIV化合物，尤其是一些先导化合物的发现为抗HIV 的化学合成，药物的遴选与开 发提供了新的途径和有益的启示。本实验旨在探讨中药青龙爪的抗HIV-1病毒作用，积极寻找新型 高效的抗HIV 中药先导化合物。方法 采用植物化学柱层析的分离纯化方法对中药青龙爪进行提取 分离，通过体外抗HIV-1 的药效学实验，观察青龙爪提取物对艾滋病毒的拮抗作用，并结合作用靶 点的研究对青龙爪的作用机理进行探讨。结果 发现中药青龙爪具有一定的抗HIV-1作用，从分离 出的5个部位中筛选出2个抗艾滋病毒作用显著的有效部位，进一步研究发现作用靶点分别是gp-41 跨膜蛋白和整合酶。结论 中药青龙爪具有很好的抗AIDS病毒的作用，研究工作为进一步寻找高 效低毒的抗HIV先导化合物奠定了基础。 关键词 中草药 分离纯化 HIV-1 MT-4细胞 实验研究 艾滋病(AIDS)是以全身免疫系统严重损害为特征的致死性疾病，艾滋病的防治是国际性的重 大课题。由于艾滋病毒基因结构的易变性,致使疫苗研制面临具大困难。因为缺乏适当的动物模型 及疗效判定方法的昂贵价格,使防治艾滋病的药物研究进展也异常的缓慢。近年来，抗逆转录病毒 药的高效联合疗法(HAART)(1),在国外特别是在发达国家使用较为普遍,虽然它能使病毒载量大幅 度下降,但不能完全彻底清除,药物的不良反应较多并容易产生耐药性，这些仍是急待解决的重要问 （） 2 (3) 题。在这种形势下,中医药学的发展引起了人们的关注 。目前,人们发现植物来源 的多糖、蛋白 质、生物碱、酚酸、黄酮、香豆素等都具有很好的抗HIV活性。因此，本实验室采用体外抗HIV病 毒方法，对中草药青龙爪进行了探讨，取得了较好的结果。具体情况如下： 1. 材料 1.1实验材料与主要仪器 1.1.1 实验药物：中草药青龙爪采于北京地区；阳性对照药AZT 购自SIGMA 公司。以上两药 均经无血清RPMI 1640 培养基配制后再经0.22µm 微孔滤膜过滤除菌待用。 1.1.2 试剂：RPMI 1640培养基、进口特优胎牛血清购自美国GIBCO公司；乙醇（95%分析纯）、 谷氨酰胺、青链霉素均为国产试剂。 1.1.3 仪器：生物安全柜（哈尔滨市东联电子技术开发有限公司 BHC-1360 ⅡA/B3031004 ）； CO2 培养箱（三洋公司）；倒置显微镜（重庆光学仪器厂 XDS-1B ）；相差显微镜（OLYMPUS 公司CK40 ）；微量加样器（吉尔森公司）。 1.1.4 细胞株和病毒株：MT-4细胞与HIV-1ⅢB病毒由本实验室自行培养。 2. 实验方法 2.1 提取分离 2.1.1 青龙爪粗制剂的制备：新鲜的药材洗净，进行24h 连续萃取,萃取液经旋转干燥，旋干粉待用。 2.1.2 青龙爪旋干粉的分离纯化：称取旋干粉，水溶解离心后，用植物化学柱层析分离纯化方 2006 中华中医药学会防治艾滋病学术研讨会 法进行提纯，得到5 个部位。 2.2 体外抗病毒实验 2.2.1 细胞培养：无菌条件下取20～25 万个/mlMT-4 细胞加入25cm2 的细胞培养瓶，补加13ml RPMI 1640 全培养基(1 ％谷氨酰胺,1%青链霉素，10%进口胎牛血清），置5 ％CO2 培养箱37℃培 养72 小时。 2.2.2 半