4株苯系物降解菌菌株的筛选鉴定、降解特性及其降解基因研究.pdfVIP

46卷5期 微 生 物 学 报 46(5)：753～757 2006年10月4日 Ac缸肘缸阳历口垤缸口S伽i阴 4October2006 4株苯系物降解菌菌株的筛选鉴定、降解特性 及其降解基因研究 王 琳，邵宗泽’ (国家海洋局第三海洋研究所海洋生物遗传资源重点实验室厦门361005) 摘要：分别以苯、甲苯为碳源，从厦门污水处理厂活性污泥中富集筛选获得了2株苯降解茵Bl、B2和2株甲苯降 解菌J2、J6。16s (Ad，埘D6咖r sp．)。研究表明，这些菌在pH7一lO的碱性范围内能很好生长。在以0．1％(v，v)苯或甲苯为唯一碳 源的无机盐培养基中，B1、B2菌在72小时内对苯的降解率分别为67．7％、94．2％，J2、J6菌对甲苯的降解率分别为 92．4％、84．8％。简并PCR扩增、序列分析表明，这些菌含有相同的苯双加氧酶基因，表明苯降解基因在这些降解菌 中可能存在水平转移。此外，J2，J6两株菌还含有甲苯双加氧酶基因，而且J2能在甲苯浓度为70％(v，v)的LB培 养基中生长。这些降解菌在苯、甲苯污染的生物治理中有应用前景。 关键词：苯系物；生物降解；有机溶剂耐受性；双加氧酶基因 中图分类号：Q939 文献标识码：A 文章编号：0001．6209(2006)05—0753．05 苯系化合物是一类易挥发的单环芳香烃类化合 1材料和方法 物，包括苯、甲苯、乙苯、邻、间、对二甲苯等，已被许 多国家列为优先控制污染物…。已报道的苯系物降 1．1材料 解菌主要有假单胞菌(忍e础瑚麟)、不动杆菌 1．1．1样品：2003年lO月采自厦门前浦污水处理 (Aci，刎D6僦泖)、芽孢杆菌(眈c扰凇)、红球菌 厂离心间活性污泥。 (耽。如cocc“s)、诺卡氏菌(Ⅳ0∞觇o)、罗尔斯通氏菌 1．1．2试剂：苯，甲苯色谱标准，纯度大于99．5％， o。苯系物双 (舷舀zon如)、产碱杆菌(A池Z诹尼es)等幢o 购自中国上海试剂一厂。其它试剂均为分析纯。 加氧酶和单加氧酶是降解过程中的关键酶，双加氧 1．1．3培养基：选择性无机盐培养基(MM)：每升含 酶是在苯环上直接加2个氧形成儿茶酚；单加氧酶 NaCll．09，MgS04‘7H200．79，NH4C11．09，KClO．79， 则直接攻击苯环或者氧化侧链，进而形成儿茶酚，再 KH2P04 经过儿茶酚双加氧酶作用使苯环裂解，进一步被降 适量微量元素混合液。微量元素混合液每升含 解后进入三羧酸循环¨’5J。 CaCl20．02rIlg，FeCl3。6H20O．5mg，CuS040．005mg， 此外，苯系物降解与有机溶剂耐受相关。自从 MnCl2·4H20 0．005IIlg，ZnS04·7H20O．1mg。以苯或 日本Inoue和Horikoshi分离到一株能够耐受50％ (V，v)甲苯的假单胞菌№o以来，一些耐受高浓度有甲苯作为唯一碳源，终浓度为0．1％(V／V)。苯、甲 机溶剂的菌陆续被分离到，并展开了相关研究。降 苯及微量元素加入前经O。22肚m孔径的滤膜过滤除 解菌耐受有机溶剂不仅对污染物的生物治理非常重 菌。 要，且在溶剂．水两相生物转化中也有很大的潜 1．2降解菌的富集和筛选 力]。在国内，苯系物