乌贼墨糖胺聚糖的制备、理化性质、结构和生物活性研究.pdfVIP

中国资源生物技术与糖工程学术研讨会论文集.2005 A贼墨糖胺聚糖的制备、理化性质、结构与生物活性研究 李孝东，王凤山。，曹吉超，姬胜利，崔慧斐 (山东大学药学院生化与生物技术药物研究所、山东济南25。饥2} 本研究从曼氏无针乌贼 (SepiellamaindronideRachebrune)的墨汁中提取得到了 一种糖胺聚糖 (GAG)，对其理化性质、糖链结构进行了初步研究分析，并对其生物活 性进行了探讨，为进一步研究和开发乌贼墨GAG打下了基础。研究的内容和取得的结 果如下. 1乌贼墨GAG的制备方法和理化性质研究 采用胰蛋白酶、链霉蛋白酶两次酶解，氯仿处理除去蛋白质，通过乙醇沉淀,DEAE- 纤维素离子交换柱分离、SephadexG-25凝胶层析脱盐，从曼氏无针乌贼 (Sepiella maindronideRochebrune)的墨汁中提取纯化得到了乌贼墨GAG:该乌贼墨GAG为白 色絮状物，无臭，无味，比旋度为一12.720醋酸纤维素薄膜电泳显示单一区带。紫外扫 描无蛋白质的特征吸收峰;红外光谱分析，样品具有典型的GAG吸收峰;该GAG完 全酸水解后薄层色谱研究表明该GAG主要由的氨基半乳糖 (GaIN),葡塘醛酸 (G1cUA)、和岩藻搪 (Fuc)三种单糖组成，含量分别为26.5%,30.3%,24.1%;乌 戚墨GAG含有8.5%的硫酸荃;结合红外光谱对官能团的分析，该GAG是由等摩尔比 例的GaINAC,GIcUA、和Fuc构成:采用高效液相排阻凝胶色谱法 (HPGPC)测得 乌贼墨GAG的重均分子量 (Az)为30499,数均分子量 (丽n)为207660 2乌贼墨GAG的糖链结构研究 采用高碘酸氧化、Smith降解等传统化学分析方法，结合IR,H-NMR和”C-NMR 等对该乌贼墨GAG的单搪构型、连接次序、糖昔键的位置等结构情况进行分析研究， 推测其主要结构为[--6)GaINAca(1-3)GIcUAP(I--3)Fuca(1一」n。 3乌贼墨GAG的抗肿瘤、免疫活性及对CTX所致小鼠微核率的影响 体外实验表明乌贼墨GAG不能够抑制HepG:肝癌细胞的生长，其ICS。为 巧3.7uglml,说明其几无细胞毒活性。单独腹腔注射乌贼墨GAG对S180实体瘤无抑制 作用;与CTX联合应用亦不能提高CTX的抑瘤率，但可明显改善荷S,8。小鼠的症状， 井降低小鼠死亡率。与CTX联合应用。高剂量组胸腺指数、脾脏指数及白细胞数明显 增大，提示乌贼墨GAG能提高荷瘤小鼠免疫功能，对CTX所致荷瘤小鼠胸腺和脾脏 萎缩有保护作用. 初步考察了乌贼墨GAG对于离体淋巴细胞功能的影响。MTT法研究结果显示乌贼 墨GAG在3.125~100uglml对ConA活化和未活化的小鼠脾淋巴细胞增殖均具有一定刺 — 生 国资禅生些技术与粉工租学术研讨会论丈集2005 激作用:腹腔注射乌贼墨GAG20mg/(kgd)，体外试验对由ConA诱导的荷瘤小鼠脾淋 巴细胞增殖有明显的促进作用;3H-TdR法研究表明乌贼墨能增强人外周血淋巴细胞的 增殖:抗体形成细胞检测表明，乌贼墨GAG不能促进抗体生成反应。以上实验初步说 明乌贼墨GAG能增强T淋巴细胞介导的细胞免疫，而对B淋巴细胞介导的体液免疫没 有影响。 微核实验表明，乌贼墨GAG能拮抗CTX所致荷瘤小鼠微核增加，提示乌贼墨GAG 具有抗突变作用。 4乌贼墨GAG对凝血系统的影响 采用羊血浆法测得乌贼墨GAG的抗凝效价小于Su/mg，几无抗凝活性;在体外其 对凝血酶原时间 P〔T)、部分活化凝血酶原时间 (APTT)和凝血酶时间 (TT)等凝血 常规指标没有明显的影响:以上实验初步证明乌贼墨GAG在体外对凝血系统没有影 响。 关键词:乌贼墨;糖胺聚糖:制备:理化性质;结构;生物活性