通城猪高致病性猪蓝耳病抗性相关基因筛选.pdfVIP

猪遗传育种 通城猪高致病性猪蓝耳病抗性相关基因的筛选 周平，翟珊莉，周翔，林平，徐学文，刘榜+ 农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室农业部猪遗传育种重点开放实验室，华中农业大学，武汉430070 关键词：猪；高致病性猪蓝耳病；猪肺泡巨噬细胞；抗性；Affymetrix基因芯片 引言 猪蓝耳病又称猪繁殖与呼吸综合症，是猪的重要传染病，以妊娠母猪繁殖障碍和各年龄段猪呼吸道症状为主 porcine and 要特征。高致病性猪蓝耳病(Highlypathogenicrespiratoryreproductivesyndrome)是由猪繁殖与呼吸 综合征病毒变异株引起的一种急性高致死性疫病。2007—2008年，该病在越南、中国、菲律宾相继暴发，导致中 国约24．3万头猪的死亡，但地方品种通城猪无一例发病。为揭示通城猪对猪蓝耳病抗性机理，本研究选择不易 感的通城猪和易感的大白猪进行人工感染，利用芯片杂交研究两品种间猪蓝耳病的抗病力差异研究，本研究为通 城猪对猪蓝耳病抗性遗传机理的揭示及抗病育种研究奠定基础。 材料方法 无特定病原体的通城猪和大白猪(5周龄公猪)各12头，其中6头用于阴性对照，6头用于人工感染 mL／15 (PRRSV．Wuh2毒株，肌注，TCID50为10—5／mL，3 kg体重)，感染后5～7天屠宰。采集血样及组织 样等用于血常规、病毒含量、石蜡组织切片等分析。灌洗收集肺泡巨噬细胞(PAM)并提RNA，感染前后各 normalization 的方法进行校正，然后用SAM软件中的t检验分析筛选差异表达基因。应用DAVID数据库 (http：／／david．abcc．ncifcrf．gov)和Genespringl0．0进行基因本体功能分类及生物学通路分析。 结果 大白猪和通城猪感染高致病性猪蓝耳病后表现出典型的呼吸道症状、食欲减退或废绝、体温升高、抽搐等， 但通城猪的病症要轻于大白猪。解剖观察及石蜡切片显示肾脏局灶性出血、非化脓性脑炎、间质性肺炎等症状， 大白猪综合病变程度较通城猪更为严重。在PRRSV感染后第2天，外周血嗜中性粒细胞比值在通城猪中升至 最高，而在大白猪中降至最低，随后又趋于一致。病毒血症、肺组织及肺泡巨噬细胞中的病毒含量品种间差异 不显著。 调，17个属于下调。对差异表达基因进行了基因本体功能分类及生物学通路分析，发现其中84个基因可以找 到功能注释，依据分子功能(molecular 70个属于下调。其中200个基因可以找到功能注释，依据分子功能(molecular 个基因可以在生物学通路(biologicalpathway)中找到注释。并可划分为5l类。 讨论 我国地方品种通城猪在生产实践中对高致病性猪蓝耳病表现出一定的抵抗力。在本研究的肌注急性感染条 件下，通城猪和大白猪均出现典型的病变症状，但通城猪在程度上轻于大白猪，进一步显示出通城猪抗病力的 相对优势。通城猪和大白猪各自在感染前后的差异表达基因在数目和类型上的不同为我们发掘通城猪抗病力相 关候选基因提供了素材。本研究的数据正在做进一步的验证和分析。 致谢 析方面提供的帮助!+通讯作者：刘榜，liubang@mail．hzau．edu．ell 一30l～