同步荧光法研究白眉蝮蛇蛇毒酶发色团微环境.pdfVIP

第27卷增刊 福州大学学报(自然科学版) V01．27 121监!旦 !!坚!堕坠!!!!!盟型!坐璺!呈!!!!!12苎璺巳：!!塑 一 同步荧光法研究白眉蝮蛇蛇毒酶发色团的微环境 孙明忠，丁兰，李伟国，赵大庆，倪嘉缵 (中国科学院长春应用化学研究所，吉林长春130022) 摘要：利用同步荧光技术对长白山白眉蝮蛇蛇毒中纯化得到的4种酶：磷脂酶A2(phospholipase cnzymc，FEasc)和L一氨 A，．PLA2)、精氨酸酯酶(argininccstcrasc，AEasc)、纤溶酶(fibrinolytic acidoxidase。L—aaoxidasc)进行了研究．结果表明：当A2；20nm时，酶 基酸氧化酶(L-amino nm时，酶的荧光主要由色氨酸仃fp)所贡献． 的荧光主要由酪氨酸(Tyr)残基所贡献；当△^≥75 而且，长白山自眉蝮蛇蛇毒4种酶的Tyr和Trp残基所处的微环境并不相同． 关键词：蛇毒：酶：同步荧光 中图分类号：0657 文献标识码：A 蛇毒是自然界中最丰富最集中的酶源之一，主要由酶、蛋白质、核苷以及金属离子所组 成，迄今为止人们已经从各种蛇毒中纯化得到了近40种酶”3．交替使用DEAESephadex 到了4种酶：磷脂酶A≯，L一氨基酸氧化酶。3，纤溶酶和精氨酸酯酶，SDS-聚丙烯酰 胺凝胶电泳和激光解吸质谱鉴定为纯品．并静J步表征了它们的酶学性质． 蛋白质分子产生荧光的结构基础在于它天然的(内源的)荧光发色团：色氨酸(Trp)、酪氨 11111波长 酸rryr)和苯丙氨酸(Phe)，三者的荧光发射峰是相互重叠的．而多数条件下，用280 的光激发蛋白分子，其荧光主要来源于Tyr和Trp残基．多数实验条件下，不能激发Phe， 而且蛋白质分子中Phe的量子产率低．采用同步荧光技术，通过选择合适的波长差可以有效 地鳃决蛋白分子中Tyr和Trp残基之间的能量传递，对于蛋白质分子结构的分析具有重要 的意义‘”． 本文应用同步荧光技术，考察了4种蛇毒酶的荧光发射强度和发射峰中心波长在不弼波 长差下的变化，并与游离态的Trp和Tyr的同步荧光谱进行了比较，研究了4种酶中Trp 和Tyr残基所处的微环境． ‘ 1样品制备和实验仪器 磷脂酶A：、L一氨基酸氧化酶的制备参照“。3；纤溶酶和精氨酸酯酶经DEAE ‘ A一50、SephadexG一75和DEAESephadexA一50三步层析制得． Sephadcx W氙灯；1ClTI四通石英液体池，操作均由计算机控制． RF一5000型荧光光度计；150 收稿FI期：1999—Os—10 作者简介：孙明忠(1971一)．男，博士研究生 基金项目：吉林省科委资助项目(962907) 增刊 孙明忠等：同步荧光法研究白rd蝮蛇蛇毒酶发色团的微环境 ·101· 2结果与讨论 2．14种酶的普通荧光光谱 使用浓度为 0．02tool／L的 Tris-HCl(pH7．50)配制浓度均为2／Jmol／L 的4种酶的样品液，磷脂酶A2的最大发射峰 中心波长为345．6nm，其荧光激发以及发射 谱见图1．其余3种酶的发射峰中心波长分别 为345．6