SOD和L%3d半胱氨酸在金电极表面的循环伏安过程电化学现场拉曼光谱研究.pdfVIP

D014 SoD与L．半胱氨酸在金电极表面的循环伏安过程 电化学现场拉曼光谱研究 曹晓卫，孟晓云，王桂华，吴霞琴，章宗穰 上海师范大学化学系电化学研究室，上海200234 B也ail：xwcao@shmeducⅡ 铜-锌超氧化物歧化酶(supero妇dedismutase，SOD)分子，其功能在于催化分解有毒害作用 的超氧阴离子自由基(O：一)，对生物机体起着重要的保护作用【1】。 近期，我们通过循环伏安实验研究发现，L．半胱氨酸对sOD在金丝电极上的电子迁移过 程存在着明显的促进作用…。为深入揭示这一促进过程的微观机制，本文介绍以电化学现场拉 曼光谱技术研究SOD与L半胱氨酸混合溶液在金电极表面的循环伏安过程所获得的结果。 1．实验 L-半胱氨酸的盐酸盐由上海丽珠东风生物技术有限公司生产，其溶液浓度为2mM：猪红 细胞铜-锌超氧化物歧化酶SoD由华东理工大学制备，平均分子量为32000，比活为3000u／m＆ 溶液浓度为O．26mM：其余的试剂均为分析纯，并采用二次蒸馏水配制各测试溶液。 电化学实验装置为EG＆G队RC系列的电化学测试系统。采用自制的光谱电化学膝位池为 电解池。研究电极为金丝电极(啦mm)，并咀饱和甘汞电极参比电极，铂片为对电极。蚍磷酸 5mm。 盐缓冲组分控制样品溶液pH=7。原位池中样品液层厚度约为l 电化学现场的Ram锄光谱袤征采用DlLORSup日Labm口共焦显微拉曼光谱仪。以时间 扫描(time scanning)信号采集方式对电化学循环伏安扫描全程实时跟踪。 在本实验中，将一定量上述浓度的SOD与L一半胱氨酸溶液等体积混合，加入到光谱电 化学原位池中，在一olov(vs．SCE，以下同)的电位下阴极极化约50分钟。而后，以一O．2V 为扫描起始电位，扫描速率为50mv，自缸n，在一o．2V一+O 4V之间进行循环伏安电化学现场的 时间扫描拉曼光谱实验研究。 2．结果与讨论 上述实验中的电化学现场的时间扫描拉曼光谱如图1所示。该图给出了以时间扫描方式获 得的24幅反映拉曼光谱随扫描电位变化的光谱。 在作者已有的以电化学现场拉曼光谱方法对L．半肮氨酸在金电极表面的电化学修饰过 程、SOD在L．半胱氨酸修饰的金电极上的循环伏安过程的研究工作中，已对有关诺峰的归属 作出了初步的指认口I。这些低频谱峰伴随着电位的变化情况反映出如下的一些规律。 上海市教委高校青年科学基金资助项目 D014 图1 L半胱氨酸与SoD混合溶液在金屯极表面循环伏安过程现场时间扫描拉曼光谱 (光谱位移的单位为：cm_1，光谱强度的单位为：a．u，时间单位为：秒) 40 首先，在电位由一0-20V向+o V的扫描过程中，由于束预先将k半胱氨酸修饰在电极表 面，对于SOD与L-半胱氨酸的混合溶液体系，即使在．0．1 V电位下进行较长时间的阴极极化， 由于缺乏修饰在金电极表面的L-半胱氨酸对SOD电子迁移反应的促进作用，在扫描电位到达 sOD的氧化峰电位o．20v之前，仍可同时显著地观测到表征sOD还原态和氧化态中活性位cu．N 表明猪红细胞SOD在无L半胱氨酸修饰在金电极表面的条件下，其在金电极表面的电子迁移 反应速度较慢。 其次，在正向电位扫描过程中，当扫描电位到达～0．20V即SOD的氧化峰电位时，在278cm_1 处表征SOD还原态的拉曼特征谱峰，被316cm-1处的表征卜半胱氨酸与金电极表面间形成的 Au．S键的谱峰所取代。这之后，随着电位扫描过程的进行，这—特征峰基本上不再随电位变 化。表明了通过电位扫描过程，L．半胱氨酸已稳定地吸附在金电极表面。而同时，在416cm-， 处表征氧化态SOD的拉曼特征峰，其强度则随着电位的变化稍有而减小。此外，该实验表明， 猪红细胞SOD可以直接在金电极表面进行缺乏可逆