FTIR+Microscope光谱法研究女贞子对自由基损伤红细胞膜脂分子保护作用.pdfVIP

第18卷，第4期 光谱学与光谱分析 ：：：!竺!盆 §2：：：：：：：：22=：21i2：：：：：：垒：：!：尘 ， 垒：§：：：：：：：：， FTIR Microscope光谱法研究女贞子对自由基损伤 红细胞膜脂分子的保护作用” 刘丹晶1 东野广智2 孙素琴3 周群3 黄益民1 胡鑫尧3 t北京心肺血管疾病研究所缸液流变研究皇，1∞。29北京 2广东医学院中心实验室，524023广东，湛江 3清华大学分析中心，100084北京 引 言 羟自由基对细胞膜的脂质分子具有氧化作用而使它们变性．其中对脂质的氧化往往使不饱和脂肪酸链 中的双键转化为单键，从而形成饱和脂肪酸，导致膜脂分子的流动性下降[1]。采用中药抑制自由基的损伤一直 是医学界所关心的热门课题。 反应中只有当主要抗氧化物质被明显消耗后，细胞才会发生氧化损伤。前期研究证明了许多药物对自由基的 Lueidum Air)被认为是具有较强的自由基 过氧化损伤具有不同程度的减轻作用o]。其中女贞子(Ligustrum 清除作用的中药之一。为探明女贞子对自由基损伤红细胞膜磷脂分子流变性的保护作用机理，本文首次利用 显微红外光谱法(FTIR 中的变化规律。 实验方法 一、样品制备 1．自由基对红细胞的损伤及恢复 取六名成人红细胞经等渗磷酸缓冲液(PBS)清洗两遍后分别加入配制好的自由基体系在室温下作用30 分钟，作用后的红细胞经PBS清洗两遍，部分用于测定，部分再在室温条件下于PB8中静置3小时后测定。 2．红细胞血影的涮备 胞血影， 二、仪器设备和方法 所用仪器为PerkinElmer公司的5ystem 别将以上制备好的红细胞血影涂抹在CaFz盐片上，采集光谱图，分辨率4cm一1．100次扫描累加。 结果与讨论 女贞子的主要成分中的分子或含有羟基或含有不饱和键，因此几乎所有成分都可通过与自由基发生氢 抽提反应，为自由基链式反应提供了电子受体．而抑制其对生物分子的过氧化作用。 *国家自然科学基金支持项目 118 光谱学与光谱分析 第18卷 一、女贞子对P—o的保护作用 由表l可知加入女贞子后自由基对P=O的损伤程度比损伤3小时后有明显减轻。分析原因一方面由于自 由基与女贞子本身所含之羟基友生氢抽提，剩余的含不配对电子的氧与另一个自由基结合l另一方面女贞子 棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚麻酸成分中所含不饱和C=C键上的氢也会同时被自由基抽提，形成以碳为中心 的脂自由基，从而清除了体系中的部分自由基，达到部分减轻自由基对P盒O的氧化作用． 表1 自由基损伤30分钟、34,时及女贞子保护作用前后红 细胞骥分子化学基团百分含量的变化(x士sn) 二、女贞对c篁c的保护作用 c宅c是构成膜磷脂分子不饱和脂肪酸链的成分，位于膜磷脂分子的疏水尾部。实验结果显示，女贞子对 c≈c的自由基损伤基本无保护作用。这是因为女贞子主要成分中的羟基为水溶性，羟基在水溶液中可饵离 失去氢使氧根带有极性，不易跨膜进入膜磷脂分子的疏水尾部区，从而只能对亲水头部的P=O起保护作用 而不能保护自由基对膜疏水区C=C的氧化损伤。 三、女贞对c=o的保护作用 C=O位于膜磷脂分子的颈部．被磷脂分子亲水头部所掩盖。女贞子不能抑制自由基对红细胞膜磷脂分 子C=O双键空间取向的影响，从雨不能抑制红细胞膜脂构象的改变。 结 论 女贞子只能部分防止自由基引起的P=O的改变，而对于自由基对膜脂分子疏水区c；c的攻击以及由 于膜