不同pH值下金属硫蛋白电喷雾质谱研究.pdfVIP

不同pH值下金属硫蛋白的电喷雾质谱研究 沈金灿 黄志勇 庄峙厦 王小如 厦门大学化学系，现代分析科学教育部重点实验室，厦门，361005 摘要本文通过考察不同pH值下金属硫蛋白与Zn的结合情况，结果表明pH极大地影响了其 在电喷雾质谱中的检+kili，同时pH也决定了金属与硫蛋白的结合形态，。在比较理想的电离的 条件下发现，在pH3.0时主要以脱金属硫蛋白的形式存在:pH4.0时金属硫蛋白结合了4个 Zn, 关键词 金属硫蛋白电喷雾质 金属硫蛋白(metallothioneins，简称NITS)是一大类富含疏基的小分子蛋白质 (分子量 9000Da)，具有很强的金属结合能力，哺乳动物MT每分子可结合7个二价金属离子或12个 一价金属离子。1957年Margosh和Vallee[〕在研究锅的生物学作用时，从蓄积锅的器官马肾中 第一次分离出含锡的该种蛋白。迄今的大量研究表明，MT在重金属解毒、微量元素的代谢及 自由基清除等方面发挥着重要的作用。关于MT的结构与功能的研究一直是科学家关注的热 点，其中哺乳动物Cd7-MT和C街-Zn2一MT的三维结构已分别用NMRr2]和X射线衍射法[31测 定。研究结果表明，二价金属离子在MT中全部与硫原子四面体配位，并通过桥联的硫原子 形成M2+4SII和M2,Sq两个金属一硫簇，相应组成。一、p一两个结构域。 本文通过考察了金属硫蛋白在不同pH值条件下的质谱行为，结果发现pH值极大的影响 了金属硫蛋白的在电喷雾质谱中的检测，进一步的研究表明不同pH值决定了硫蛋白与金属的 不同结合形态。 1.实验部分 1.1仪器与试剂 美国HewlettPackard公司HPI100LC/MSD系统，Millipore超纯水制备装置。 Zn诱导MT(湖南麓谷生物技术公司)，三氟乙酸(ICN公司)，其它试剂均为分析纯试剂， 实验中所用的水为Millipore超纯水。 1.2实验步骤 称取1.OmgMT，加入Loral超纯水，配成1.Omg/ml的储备液，4℃冷藏备用。配置1%三 氟乙酸水溶液备用。 分别移取100u1MT储备液于6个小管中，加入400u(超纯水，加1%三氟乙酸水溶液将 pH值分别调至7.0,6.0,5.0,4.0,3.0,2.0, 流动注射进样，流动相为水，流速为0.3ml/min，进样5ul, 通过考察仪器不同参数值下的工作状态，对仪器的主要参数进行优化，结果如下， 表1.仪器参数设里 仪器参数 设定值 电离电压 (V) 4500 干燥气温度 (℃) 破碎电压 (V) 2.结果与讨论 在电喷雾质谱中，pH值对被分析物质是否能带电荷从而被电离有相当重要的作用，测定 时溶液应控制在一定的酸度，如加入甲酸或乙酸等挥发性有机酸并控制在一定的浓度，从而 增大离子化效率，提高灵敏度，获得理想的结果。但是，由于金属硫蛋白对溶液PH值的敏感 性，不同的PH会改变它在溶液中的存在状态。MT在酸性水溶液中存在如下平衡队 H+ MT}-井拼卜apoMT M PH值接近中性时，MT主要以结合金属的形式存在，降低溶液的pH值，MT的金属可脱 去。MT这样的一种特性给MT的测定带来了一定的困难，为了尽量不破坏金属跟蛋白的结合， PH值应尽量控制在一定的范围，由于溶液中的酸度不足，使得蛋白的电离不足，从而无法获 得十分理想的信号强度;对于脱金属硫蛋白的检测是比较理想的，由于其溶液中存在一定的 酸度足以使其获得比较好的电离。 X11504 pH3.0 卜 pH4.0 尸 ﹃ s u PH7.0PH6.0PH5.0