长春花文多灵生物合成关键酶D4H同源基因分子生物学探究.pdfVIP

2010全国生物植物学研讨会 基因组与功能基因组 长春花文多灵生物合成关键酶 D4H 同源基因分子生物学研究 周晨，赵淑娟*，胡之璧 中药研究所，上海中医药大学，上海市蔡伦路 1200 号，上海，中国 长春花(Catharanthus roseus (L.) G. Don.)生物碱具有重要的药用价值，其中尤 以长春碱（vinblastine ）和长春新碱（vincristine ）的抗肿瘤活性最令人瞩目[1]。长 春碱和长春新碱由单体长春质碱和文多灵（vindoline ）偶合而成[2]，脱乙酰氧基 文多灵-4-羟化酶（desacetoxyvindoline-4-hydroxylase，D4H EC.1 ）是文多 灵合成的关键酶[3-5]。我们应用抑制性差减杂交技术（Suppression Subtractive Hybridization ，SSH）筛选到长春花激素非依赖型细胞系C20hi 中特异表达的基因 片段[6]，在此基础上，克隆了一个与d4h 高度同源的基因 d4h-like 的全长cDNA 序列（Genbank 登录号 EF640810 ），该基因编码372 个氨基酸，与已报道的 d4h 基因在氨基酸水平具有 66%的一致性和 80%的相似性。半定量RT-PCR 实验结果 表明 d