亚洲棉油菜素内酯合成酶基因（GaCPD2）的克隆、表达分析及功能验证.pdfVIP

i麓 Onlines 鞯蠛 … 装ystem：http：w／w／茹wj．aboitecho．rggy 勖一触田 亚洲棉油菜素 内酯合成酶基因(GaCPD2)的克隆、表达分析及功能验证 鲁丽丽 屈凌波 杨作仁 杨召恩 郑武 葛晓阳 李付广 。 1河南工业大学，郑州450001；2棉花生物学国家重点实验室，安阳455000；3中国农业科学院棉花研究所，安阳455000 通讯作者，aylifug@163．com 摘 要 持续光形态建成与矮化基因(constitutivephotomorphogenesisanddwarf,CPD)是油菜素内酯 (brassinosteroids，BRs)合成中的关键限速酶，为研究棉花中CPD基因表达模式和验证其功能，采用RT- PCR方法首次从亚洲棉(GossypiumarboreumL．1石系亚1号中克隆到了一个细胞色素P450单加氧化酶基 因GaCPD2(GenBank登录号：KJ183066)。生物信息学分析表 明，该基因CDS序列长度1413bp，编码470 个氨基酸，理论相对分子质量53．98kD，理论等电点9．40，主要 由0一【螺旋、B．折叠、延伸链和无规则卷曲组 成 。多序列 比对结果表 明，GaCPD2具有细胞色素P450保守结构域，氨基酸序列与其他己报道物种中同 源基因的相似性最高为84．0％。荧光定量PCR结果表明，GaCPD2在根、茎、叶、花和纤维组织中均有表 达 ，开花后第 10天的纤维中表达量最高，是0DPA的l0倍左右 。克隆了GaCPD2基因启动子序列，生物 信息分析表明，GaCPD2基因启动子包含大量与光响应有关的顺式作用元件 以及部分胁迫应答元件 ，推 测其可能受光调控 ，参与胁迫应答。构建过表达载体转化拟南芥油菜素 内酯合成突变体cpd91(Columbia 背景1，发现转基因株系的叶片展平，株高及育性恢复至野生型，表明GaCPD2基因在BR合成中起着重要 作用，为研究油菜素内酯对棉花生长发育的影响提供了基础资料，有助于揭示BR调控植物株型及产量 性状的分子机理 。 关键词 亚洲棉，G口CPD2，油菜素 内酯，表达分析，功能验证 Cloning， Expression Analysis and Functional Verification of BrassinosteroidsBiosyntheseGene(GaCPD2)inCotton (Gossypium arboreumL．) LULi．Li一 QULing—Bo YANGZuo—Ren一 YANGZhao—En，。ZHENGWu一 GEXiao—Yang，。 LIFu—Guang。，。 1HenanUniversityofTechnology,Zhengzhou450001，China；2StateKeyLaboratoryofCouonBiology,Anyang455000，China；3Co~on ResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Anyang455000，China Correspondingauthor,aylifug@163．com Abstract Constiuttivephotomorphogenesisanddwarfgene(CPD)isakeyrate—limitingenzymein brassinosteroids(BRs)synthesis，geneexpressionpatternsandfunctionsofwhichinArabidopsis，rice(Oryza sativa)andtomatofLycopersiconesculentum)havebeenresearched，andnotincotton(Gossypiumarboreum L．)．TocloneandverifyCPD genefunctionincotton，acytochromeP450monooxygenasegene，GaCPD2 (GenBankaccession：KJl83066)wasclonedfrom