安徽乌塌菜SRAP反应体系的建立和优化.pdfVIP

园艺学报2009，36(增刊)：1961 ActaHorticulturaeSinica———— 安徽乌塌菜SRAP反应体系的建立与优化 王明霞。，严从生，江海坤，董言香，方 凌，张其安 (安徽省农业科学院园艺研究所，合肥230031) 安徽乌塌菜是安徽省的著名特产之一，起源于南北气候区之间，对于研究白菜类的进化与分化能 够提供有价值的线索。同时，安徽鸟塌菜具有很多优良性状，如抗寒性、耐抽藿等，对作物遗传改良 具有霞要的利用价值。加快安徽乌塌菜的分子生物学研究是今后进行鸟塌菜种质资源深度开发和利用 以及遗传改良的重要保障。SRAP标记具有多态性丰富、重复性好、操作简便快速、高共显性、在基 因组中分布均匀、易测序、不需预知物种序列信息以及成本较低等优点，目前已广泛应用于许多作物 的遗传图谱构建、基因定位及QTL分析、遗传多样性分析、品种鉴定、杂种优势预测、比较基因组 学等诸多领域。 本研究首次利用正交试验设计对安徽乌塌菜SRAP反应体系进行优化，以期得到安徽乌塌菜的 SRAP最佳反应体系，从而为今后的安徽乌塌菜分子生物学研究提供技术支持。 以‘合肥黄心乌’叶片DNA为模板，利用正交试验设计，对SRAP—PCR反应体系(总体积为10 pL)中的M矿+浓度(分别为2，0、2．5、3，0、3．5 0．3、0．4 mmol·L一)、引物浓度(分别为0．2、0．3、0．4、0．5txmol·L一)、Taq聚合酶浓度(分别 为0．5、0．7、0．9、1．1U)和模板DNA浓度(分别为20、30、40、50ng)进行5因素4水平的筛选 分析，用Me3一Em3引物组合进行PCR扩增以确定最佳反应体系。 buffer mmo|· 试验结果表明，安徽乌塌菜SRAP-PCR最佳反应体系为：10×PCR 2灿、M92+3．0 0．2 40 L～，dNTPsmmol·L～，引物0．5I山mol·L～，模板DNAng、细聚合酶0．5u，总体积为10 mmol·L一时，增加 度的增加，扩增条带逐渐增多，且条带颜色逐渐加深；当M矿+浓度大于3．0 增加M92+浓度不能明显增加扩增条带；引物浓度在0．2—0．5wmol·L叫之间扩增条带无明显差异， 但在低引物浓度下，扩增条带颜色较浅。随着浓度的增加，扩增条带颜色逐渐加深；TaqDNA聚合酶 浓度和模板DNA浓度在反应体系中对扩增结果影响较小，在一定范围内几乎无差异，主要是通过与 其它因素互作而影响扩增效果。利用优化的反应体系对35份安徽乌塌菜资源进行验证，证明该体系 能很好地满足安徽乌塌菜基因组DNA的SRAP扩增的要求，SRAP标记应用于安徽乌塌菜遗传学研究 是可行的。 关键词：乌塌菜；$RAP 中图分类号：S634．4 文献标识码：A 文章编号：0513-353X(2009)S-1961-01 收稿日期：2009—08一lO ，E·嘲il：w酬02@yahoo．COIII．en