磁性活化细胞分选系统分离提纯小鼠骨髓CD34%2b造血干细胞.pdfVIP

仅表达于TH2 细胞，在TH1 细胞上不能检测到，T 细胞表达GATA-3 突变体的转基因小鼠其TH2 反应受抑制，IL-4 、IL-5 、IL-13 等细胞因子水平降低。T-bet 选择性地表达于 TH1 细胞，仅发现于 肺、胸腺和脾等脏器。T-bet 激活TH0 细胞产生大量IFN- γ，还能完全逆转已分化的TH2 细胞。Chakir H 等认为GATA-3 和T-bet mRNA 水平可用来代表机体TH2/TH1 分化的平衡状态。目前Alexandre 等的研究已发现PPAR- γ使肺组织GATA-3 蛋白下降，而有研究称PPAR- α对T-bet 无调节作用。我 们的实验发现PPAR- γ使肺组织GATA-3MRNA 下降，而T-betMRNA 与哮喘模型组比较表达上升。 考虑PPAR- γ对GATA-3 或T-bet 的调节作用，可能分别存在直接的调节作用。但由于GATA-3 和T-bet 之间存在相互抑制和影响的作用，因此也有可能是PPAR- γ降低GATA-3 表达，而GATA-3 的低表 达减轻了对T-bet 的抑制作用，从而出现T-bet mRNA 表达上升的现象，反之亦然。 为了最终观察PPAR- γ与TH1/TH2 路径的影响，我们检测了GATA-3 和T-bet 的下游因子IL-5 和IFN- γ的表达水平。IL-5 作为TH2 型细胞因子，被认为与EOS 摹集浸润、气道黏液高分泌状态 及气道高反应性有关。我们的结果显示PPAR- γ降低外周血IL-5 表达，和Alexandre 等的研究结果 一致。 IFN- γ是TH1 型细胞因子，在哮喘中被认为是具有保护作用的关键因子。目前已有的研究 结果显示PPAR- γ的作用对IFN- γ表达的影响并不明确， Véronique 等在体外实验中检测到罗格列 酮使哮喘小鼠T 细胞IFN- γ下降，而Hamida Hammad 等]研究发现罗格列酮使哮喘小鼠T 细胞分泌 IFN- γ水平显著上升。在我们的实验中则发现PPAR- γ提高IFN- γ的表达。此外，在我们的实验中 提示，IFN- γ水平和T-bet mRNA 水平呈现一致的变化趋势。选用不同的PPAR- γ激动剂、或者不同 的剂量、给药途径、整体实验和离体培养的差异等可能是各研究结论不一致的原因。另外 PPAR- γ 对GATA-3、T-bet 两者的作用孰强孰弱也是影响最终下游因子表达量的未知原因。总之， PPAR- γ 对TH2/TH1 途径的作用还有待更细致的研究。 PPAR- γ抑制哮喘炎症的机制还有待于进一步阐明。我们的实验显示PPAR- γ抑制哮喘小鼠 EOS 浸润，降低气道黏液分泌和储备，其可能的机制与调节GATA-3、/T －betmRNA 平衡及最终影 响相关的细胞因子IL-5 、IFN- γ有关。 + 磁性活化细胞分选系统分离提纯小鼠骨髓CD34 造血干细胞 贲素琴 沈华浩 浙江大学医学院附属二院呼吸科 浙江大学呼吸疾病研究所（310009） 造血干细胞又称多能干细胞，它不仅具有向多系造血细胞定向发展的潜能，而且还可以增殖分 化形成多种不同组织细胞。造血干细胞的可塑性决定了它具有潜在的广泛的临床应用前景。对造血 干细胞的研究引起了人们极大的兴趣。目前，造血干细胞研究面临的首要问题是如何获得纯化的造 血干细胞，以去除其它细胞对后续研究的影响。CD34抗原作为一种阶段特异性抗原，它选择性的表 达于早期造血干/祖细胞，临床和基础研究中常根据CD34抗原的表达有无来分离提纯早期造血干细 ·110 · 胞。用于CD34+ 细胞分离纯化的方法有：组织培养瓶铺展贴壁（CELLector 培养瓶）、亲和吸附柱 分选（CEPRATE ）、免疫磁珠（Dynabeads ）、荧光活化细胞分选系统（Fluorescence Activated Cell Sorting，FACS ）、磁性活化细胞分选系统（Magnetic Activated Cell Sorting ，MACS ）等，目前研究 的结果表明，对来源于人的各种样本，最高效可靠的分离方法是MACS和FACS ，二者皆可获得高纯 度（70% ）的CD34+ 细胞。对小鼠来源的样本，何种分选方法为佳，报道不多。本实验旨在探讨用 磁性活化细胞分选系统分离提纯小鼠骨髓CD34+