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酵母细胞微波破碎及胞内海藻糖分离纯化的研究 刘传斌云战友谢健李宁王战会圃苏志国 2) (大连理工大学生4E．．T-程研究所大连11601 摘要面包酵母细胞经60s微波破碎处理后．胞内海藻耱很容易被提取出来．提取液中的蛋 l 白质等大分子物质经絮凝脱除后，再经过离子交接处理，最后浓缩结晶，即可得到海藻糖晶体． ； 关奠词酵母微波破碎薄藻糖分离纯化‘ 1前言 海藻糖是酵母中储存性二糖，它具有在干燥蘩件下保持蛋白质、核酸等大分子物质的结构 和功能不受破坏的特异功效…。作为一种生物制品活性保护剂和食品添加剂，海藻糖在蛋白质、 酶类、疫苗、菌苗、基因工程药物以及食品、化妆品的生产中具有广阔的应用前景[2】。不同种类 的酵母，其合成海藻糖的能力有很大差异。对于菜一株酵母菌，由于酵母胞内海藻糖合成酶及 其分解酶同时存在，故在酵母生活周期的不同阶段，胞内海藻糖的含量随两种酶活性的改变而 动态变化。一般来说，酵母细胞在高温、营养缺陷等逆境条件下，大量积累海藻糖；在酵母快 速增殖期，胞内海藻糖含量很低[3]。 酵母中海藻糖的分离纯化，_般[n6】采用酒糟做溶剂沸点提取，再经超滤、离子交换后，结 晶得到海藻糖晶体。此方法成本很高，其原因一方面在于酒精提取收率低，此外，采用超滤等 工业上难于稳定操作的方法，既不利于稳定生产、、也给工业放大带来困难。 本文利用微波加热高穿透性、‘高选择性及高教快速等特点，首先在微波场中将降解海藻糖 的海藻耱酶灭活，同时将细胞破碎，然后，在常韫下用水迅速把海藻糖溶出。提取液经絮凝脱 蛋白、离子交换脱盐脱色后进行结晶，得到高纯度的海藻糖。 2材料与方法 ； 2．1实验材料 实验所用酵母为市售活性鲜酵母(哈尔滨玛祷酵母有限公司生产)。 2．2实验方法 2．2．1酵母细胞的微波破碎口]将10 ml烧杯中，铺成厚度为5mm的一层， g活性鲜酵母置100 j · S。 置微波炉中处理30—300 上清液即为提取液。 。 2．2．3海藻糖晶体的制备将提取渡浓缩10倍后，加入絮凝剂，过滤脱除蛋白质等大分子物质 后，分别流过阴阳离子交换树脂脱盐脱色，得无色溶液。将上述溶液浓缩结晶。得海藻糖晶体。 2．2．4海藻糖酶活性的测定参见史献【8】。 ’ 3结果与讨论 3．1微波对酵母细胞结构的影响 414 将储存在4C冰箱的活性鲜酵母置输出额率为2450蛐Z、最大功率为750W的微波炉中处理。 处理30s后，酵母由块状固体变为流体，并有大量的水蒸气释放出来。若处理时间继续延长， 酵母细胞逐渐失水干燥。从扫描电子显微镜照片[81可见，微波处理后的酵母细胞体积变小，细胞 表面收缩，且有明显的裂纹出现。这表明，经微波处理后，酵母细胞壁和细胞膜结构的完整性 被严重破坏。因此，把这种采用微波处理而实现的细胞破壁方法称为微波破壁。 3，2微波对海藻糖酶的灭活作用 海藻糖酶是酵母细胞内可迅速把海藻糖降解为两分子葡萄糖的一种水解酶，酵母胞内海藻 糖含量波动很大的原因就是因为海藻糖酶的存在。当把逆境状态下的酵母转移到营养丰富、适 于分裂的环境中时，胞内的海藻糖在酵母出芽之前几乎就会被完全降解。因此，如何抑制海藻 糖酶的活性，是影响海藻糖提取得率高低的关键因素之一。利用微波穿透力强、升温快的特点。 通过微波处理迅速使海藻糖酶丧失活性。由图1可见，海藻糖酶在微波场中失活很快，60s后， 酵母胞内海藻糖酶活性完全丧失，这是其他常规手段所无法达到的。 }c口，ilt-em■J{