鲍鱼菇提取物抗氧化活性地研究.pdfVIP

鲍鱼菇提取物抗氧化活性的研究 李乐 傅明 石立三 江荡 刘方 (天津市 南开大学生命科学学院 微生物系 邮编 300071) 摘 要:本研究通过对她鱼菇 (pleurotusabalonus)子实体热水抽提，乙醉沉淀和DEAE纤 维素纯化后，获得八种成分。接着分别测定了八种成分的总酚、多糖、蛋白含量，以及这些成分 的抑制红细胞溶血 (HernolysisInhibition)和脂质过氧化 (malondialdehydeInhibition)的活性。 结果显示测试样品的总酚含童与其杭氧化活性呈正相关。由此推浏鲍鱼菇有可能是一种天然的 杭氧化剂。 关健词:杭氧化活性;总酚;多糖 药用菇类在传统的东方医学中有很悠久的历史[[1]，对菇类中的抗氧化活性成分也进行 了少量的探索。菇类积累了多种的次级代谢产物，包括酚类、ygp烯和类固醇等，菇类中的酚 类化合物已经被发现是极好的抗氧化剂[21。一些研究显示从八种菇类中提取到的多糖蛋白 复合物具有强的抗氧化性和自由基清除活性3〔]，并且发现多糖复合物中的蛋白含量可能对 其清除自由基活性具有直接的效果[3] 本研究试图通过对鲍鱼菇子实体热水抽物的分离纯化，确定其抗氧化成分，并对成分中 的总酚、多糖、蛋白含量与抗氧化活性之间的关系进行探索，为抗氧化剂的开发和应用奠定 基础。 1材料与方法 1.1 实验材料 1.1.1 实验动物 昆明鼠购自天津市劳动卫生研究所，饲养于标准实验室条件 [(21士2)C,12/12h昼夜 循环〕下，喂食标准啮齿类食物。 1.1.2 主要试剂 DEAE纤维素购自Whatman，硫代巴比妥酸 (TBA)购自Sigma公司，其他试剂均为 国产分析纯。 1.2 实验方法 1.2.1样品的制备 将干燥的鲍鱼菇子实体粉碎，室温用蒸馏水浸泡过夜，回流在85^-90℃下浸煮2h，倾 出提取液，合并滤液，减压浓缩后，将4倍体积的乙醇慢慢倒人浓缩液中，然后静置过夜。 过滤沉淀，依次用80%乙醇，100%乙醇，丙酮洗涤沉淀，脱水，即得鲍鱼菇子实体水提醇 沉物Fp以及上清Fso 1.2.2 层析 将醉沉物及上清分别溶于10mmol/LTris-HCl(pH7.4)中，上样于DEAE-cellulose 532 柱中，依次用0.lmol/LNaCl,0.5mol/LNaCl,lmol/LNaCl洗脱，洗脱物分别定名为 Fpl,Fp2,Fp3和Fsl,Fs2,Fs3。然后3mL/管收集洗脱液，分别测280nm下的吸光度， 绘制洗脱曲线。最后按照洗脱曲线合并洗脱峰，冷冻干燥，以备后用。 1.3 抗权化活性测定 1.3.1 抑制小鼠红细胞溶血活性的测定 对正常昆明雄性小鼠摘取眼球取血，收集于含0.15mol/LNaCl的离心管中，于2500r/ min离心10min，将红细胞与血浆和破碎细胞膜分离。并用 10倍体积pH7.4的PBS溶液 (10mmol/LpH7.4NatHP04-NaH2PO;缓冲液，125mmol/LNaCl)洗涤2次，最后一次 洗涤，得到完整的红细胞。 此分析体系采用过氧自由基造成红细胞溶血。以pH7.4的PBS制备20%的红细胞悬 液，加人到等体积的200mmol/L2,2一偶‘氮一双一(2-眯基丙烷)氯化二氢 (AAPH)中 (溶于 PBS)，其中含不同浓度的试样。将反应混合物于37℃温和振荡3h。然后将此体系以8倍体 积的PBS稀释，2500r/min离心10min，于540nm测定上清液的吸光值A。同样，将此体系 以8倍体积的蒸馏水稀释，以达到红细胞完全溶血，并于540nm测定上清的吸光值B.1= 抗坏血酸作为正对照。抑制溶血百分率按下式计算: 抑制率(%)=(1-A/B)X100% 1.3.2 抑制小鼠脑组织匀浆脂质过氧化作用的测定 取正常昆明雄性小鼠的脑组织，用冰冻Tris-HCL缓冲液 (20mmol/L,pH7.4)制成 1/10匀浆。所得匀浆以14000r/min离心15min，取上清备用。 在400KL反应体系，将200fiL脑组织匀浆上清液，与不同浓度的药物试样，0.lmmol/ L抗坏血酸，l0A,mol/LFeS04于37℃保温1h后，加人4001L三氛醋酸 (TCA,28%o)终 止反应，再加人600p.L硫代巴比妥酸 (TBA,1%)，