采用代谢工程方法高效生产普鲁兰多糖地研究.pdfVIP

采用代谢工程方法高效生产普鲁兰多糖的研究 徐勇虎 国华 蔡永进 许勤虎 (天津市工业微生物研究所新型糖资源研发中心 天津 300221) 摘 要:通过不同营养因子对普冬兰多据发酵的影响证明，发现采用代谢工程的方法生产 普香兰多枯比原有的传统方法在多糖产量及发酵时间上都有明显提高。 关健词:出芽短梗霉;普香兰多糖;代谢工程;营养因子;发酵 StudyonProducingPullulanMostEffectivelybyMetabolic EngineeringMethod XuYonghu GuoHua CaiYongjin XUQinhu (TianjinResearchInstituteofIndustrial Microbiology Tianjin 300221) Abstract;Theinfluenceofdifferentnutrientfactorsonthepullulanproductionarecompared anddiscussed.Theresultsofthisworksuggestthatthepolysaccharideyieldishigherandthefer- mentationtimeisshortenedbyusingthemetabolicengineeringmethodwhencomparedwithtradi- tionalmethodinpullulanproduction. Keywords二Aureobasidiumpullulans;pullulan;metabolicengineering;fermentation 出芽短梗霉 (Aureobasidiumpullulans)属于半知菌类短梗霉属，是一种酵母体细胞与 菌丝体共生菌。它可以发酵蔗糖、葡萄糖及可溶性淀粉等多种碳源并将之转化为一种胞外多 糖— 普鲁兰多糖 (又称 “短梗霉多糖”)[i7。普鲁兰多糖是以a-1.6糖昔键结合麦芽糖构成 同型多糖为主，即葡萄糖按a-1.4糖昔键结合构成麦芽三糖两端，再以二1.6糖昔键同另外 的麦芽三糖结合，如此反复连接而成高分子多糖。a-1.4糖昔键同a-l.6糖昔键的比例为2: 1，聚合度 (D.P.)为100^5000。相对分子质量 (4.8X104)一(2.2X106)，日本商品普鲁 兰平均相对分子质量2X105，大约有480个麦芽三糖组成[21。它的成膜性、阻气性、可塑 性、乳性均较强，并且具有易溶于水、无毒无害、无色无味等优良特性。因此在医药制造、食 品包装、果品保鲜、烟草加工、农业等多方面具有广阔的应用前景，有较大的经济价值[3] 发酵过程控制的目的是得到更多的代谢产物，传统的普鲁兰多糖发酵方法只是通过环境 条件的改变使其适于细胞生长和多糖合成，而代谢工程则为我们提供了新的方法。由于出芽 短梗霉是一种营养要求苛刻的微生物，需要提供许多生长必需物质才能正常地生长。核昔酸 是菌体合成细胞遗传物质的主要组分，是菌体生长的必要物质，普鲁兰多糖的前体物质尿啼 吮核昔二磷酸麦芽三糖 (UDP-maltotriose)含有尿咬陡核昔二磷酸 (UDP)。出芽短梗霉不 245 能完全自由合成核昔酸，所以只有保证充足的核昔酸，特别是尿嗜吮核昔酸 (UMP)的供 给，细胞才能正常地生长代谢，普鲁兰多糖才能正常合成。此外，由于出芽短梗霉缺乏合成 多种氨基酸的能力，外源氨基酸必须均衡全面地供给，这样保证细胞正常生长，各种酶系才 能发育良好。在此基础上，我们通过代谢工程的方法进行了普鲁兰多糖发酵实验。 1材料与方法 1.1 实验材料 1.1.1 菌种 出芽短梗霉 (Aureobasidiumpullulans)P2菌株，由天津工业微生物研究所新型糖资源 研发中心经诱变筛选获得的变异菌株。 1.1.2 培养基 (1)斜面与平板培养基组分 (g/L):马铃薯200，蔗糖30，琼脂20,pH为6.1. (2)种子培养基组分 (g/L):蔗糖30,(NH4)2SO40.2,KH2PO45,MgS0