利用ELISA 检测两种兰花病毒的研究[J].pdfVIP

浙江农业学报 ActaagriculturaeZhejiangensis21(2)：91～95，2009 利用 ELISA检测两种兰花病毒的研究 柳爱春，刘 超 ，赵 芸，徐晓丹 (杭州市农业科学研究院，浙江 杭州 310024) 摘 要：建立了三抗夹心酶联免疫吸附法(TA EusA)检测建兰花叶病毒 (Cymbidiummosaicvirus，CymMV)和 双抗夹心酶联免疫吸附法(DAS_EusA)检测齿兰环斑病毒 (Odontoglossumringspotvirus，ORSV)的方法。共检 测了浙江省内139个兰科样品和8个百合科样品，结果表明有31．7％的兰花检出CymMV，有28．8％的兰花检 出ORSV。根据病毒外壳蛋白基因上下游保守序列设计了检测 ORSV的引物，参照周国辉报道设计了检测 CymMV的引物并对人工接种两种病毒的兰花进行了逆转录聚合酶链式反应 (RT-PCR)检测，结果表明，RT- PCR检测结果与ELISA结果相一致，进一步证实本研究建立的TAS-ELISA，DAS-ELISA方法稳定可靠，重复性 好，可应用于兰花上CymMV和ORSV两种病毒的早期诊断和检测。 关键词：建兰花叶病毒；齿兰环斑病毒；TAS-ELISA；DAS-ELISA；一步法 RT-PCR 中图分类号：$682．31；$432．4 1 文献标识码：A 文章编号：11304—1524(~．o9)o2—0091—05 DetectionoftwoorchidvirusesusingELISA UU Aj．chun．LIU Chao，Zt~AOYun，XUXiao—dan (HangzhouAcademyofAgriculturalScierwesZhejiang，Hangzhou310024，China) Abstract：ThemethodsofTAS-EUSAandDA ⅡJSAwereestablishedtodetectCymbidiummosaicvirus(CymMV)and Odontoglossumringspotvirus(0 )，respcetively． eexperimentwascarride outwith139omhidaceoussamplesnad8 liliaeeoussamplesinZhejinagprovince． eresultsshowde that31．7％ ofhteorchidaceoussampleswereinfectdewit}l CvmMV．28．8％ of hteorchidaeeoussampleswereinfcetedwiht ORSV．Accordingtohteconservde sequences of coatpro— tein-encodinggenes(CP)of0 nadhtereportofZhouetal，htespecificprimersweredesignde otdetectCymMVnad 0Rs、，bvRrr_PCR from hteorchidinfeetedwiht vinlsesartificially．Ieresults of RT-PC R Was consistentwith htoseof EUSA，whichsuggestde htatthemehtodsof TAS-EUSA，Du EUSA establishde here，werereliablenadrepeatable，nad couldbeusedforearlydiagnosisnaddetectionof CymMVandORSV inorchid． Keywords：Cymbdi／mu mosaicvirus；Odontoglossmu ringspotvirus；TAS-ELISA；DAS-ELISA；onestepRT-PC R 建兰花 叶病 毒 (Cymbidium mosaicvirus， 现较长时间的隐症现象，但带毒植株开花小而 CymMV)和齿兰环斑病毒 (Odontoglossumringspot 少，花期缩短，发病兰株观赏价值和经济价值大 virus，ORSV)是发生最为普遍 的兰花病毒，广泛 大下降，还会导致种质退化，对兰花产业造成重 分布于全世界栽培兰花的地区H J，这两种病毒